【摘 要】
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目的:研究孕中期七氟醚吸入是否会导致子代出现神经损伤及认知改变,孕酮对这种损伤是否具有保护效应及相关机制。方法:选取见栓SD大鼠进行研究,在孕中期（孕14～16天）进行七氟醚吸入（浓度2.5%,2h/d,连续三天）以制备孕中期SD大鼠七氟醚吸入致子代神经损伤模型,实验分组为对照组、模型组（七氟醚吸入组,浓度2.5%,2h/d,孕14～16天连续吸入三天）和肌肉注射孕酮低（2.0mg/kg）、中（4
【基金项目】
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国家自然科学基金“孕酮通过孕酮受体对新生鼠七氟醚神经发育毒性的保护作用及机制研究（编号:81701072）”；
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目的:研究孕中期七氟醚吸入是否会导致子代出现神经损伤及认知改变,孕酮对这种损伤是否具有保护效应及相关机制。方法:选取见栓SD大鼠进行研究,在孕中期（孕14～16天）进行七氟醚吸入（浓度2.5%,2h/d,连续三天）以制备孕中期SD大鼠七氟醚吸入致子代神经损伤模型,实验分组为对照组、模型组（七氟醚吸入组,浓度2.5%,2h/d,孕14～16天连续吸入三天）和肌肉注射孕酮低（2.0mg/kg）、中（4.0mg/kg）、高（8.0mg/kg）剂量组;采用孕酮预给药（孕11-16d）后七氟醚吸入造模,取子代（一周龄和四周龄）海马组织进行检测。采用流式细胞术检测上述2个时间点子代大鼠脑海马组织细胞凋亡的发生情况;采用Western blotting技术检测上述2个时间点海马组织中突触后致密蛋白95（PSD 95）、突触素1（synapsin-1）、桥尾蛋白（Gephyrin）、胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）和胶质细胞源性神经营养因子酪氨酸激酶受体（RET）的表达水平;采用免疫荧光技术检测上述2个时间点大鼠脑海马组织中CA1区小胶质细胞/巨噬细胞特异性蛋白（iba-1）和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达情况。采用新物体识别和Y迷宫检测子代（四周龄）认知学习能力。结果:1.子代凋亡水平检测显示,母体孕中期七氟醚吸入可使一周龄子代大鼠海马组织凋亡水平显著增高（P＜0.01）,孕酮各剂量肌肉注射均可显著逆转七氟醚引起的海马组织凋亡水平升高（P＜0.01）;孕中期七氟醚吸入未引起四周龄子代海马组织凋亡水平改变。2.子代小胶质细胞和星形胶质细胞激活水平检测显示,孕中期七氟醚吸入导致一周龄子代海马组织CA1区iba-1和GFAP阳性细胞数均增多（P＜0.05）;与模型组相比,4.0 mg/kg和8.0 mg/kg孕酮均使一周龄子代海马CA1区中iba-1阳性细胞数量显著减少（P＜0.01）,8.0 mg/kg孕酮使一周龄子代海马CA1区GFAP阳性细胞数量减少（P＜0.05）;iba-1和GFAP阳性细胞数量在各组的四周龄子代海马组织CA1区中均未发现差异。3.子代GDNF/RET通路蛋白检测结果显示,孕中期七氟醚使一周龄子代海马组织中GDNF和RET蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）;4.0 mg/kg和8.0 mg/kg孕酮可改善七氟醚引起的一周龄子代海马组织中GDNF和RET表达水平降低（P＜0.05）,;GDNF/RET蛋白表达水平在各组四周龄子代海马中均无统计学差异。4.子代突触相关蛋白检测显示,孕中期七氟醚吸入可导致一周龄和四周龄子代海马中PSD 95和synapsin-1表达水平降低（P＜0.05）,对Gephyrin表达水平无影响;使用8.0mg/kg孕酮预处理后,一周龄和四周龄子代海马中PSD 95表达水平均得到改善（P＜0.05）;孕酮各剂量均对synapsin-1和Gephyrin表达水平无影响。5.子代行为认知能力水平检测结果显示,孕中期七氟醚吸入后四周龄子代学习认知能力未见差异。结论:孕酮可改善孕中期七氟醚吸入（浓度2.5%,2h/d,连续三天）导致的一周龄子代大鼠神经损伤和突触丢失,这种效应可能由小胶质细胞和星形胶质细胞的活化介导,通过GDNF/RET通路起效;孕中期七氟醚吸入（浓度2.5%,2h/d,连续三天）对四周龄子代大鼠行为认知能力无影响,但是可能导致突触损伤,孕酮可能通过较少突触损伤发挥改善作用。
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