论文部分内容阅读
流行病学统计结果表明,血清HDL水平与动脉粥样硬化(AS)发病率呈负相关。北京鸭血清HDL含量很高,占整个血清脂蛋白的70-80%,实验发现北京鸭具有抗AS的作用。本文从载脂蛋白分子水平,研究鸭血清主要载脂蛋白的结构与功能的关系及其与北京鸭抗AS作用的内在联系。 首次用高效液相层析(HPLC)法分离纯化鸭血清HDL中的所有载脂蛋白和VLDL中水溶性的载脂蛋白,发现鸭血清HDL中主要含五种载脂蛋白组分,经SDS-PAGE、糖基检测和氨基酸组成分析,确定这五种主要载脂蛋白是apoA-Ⅰ、apoCⅢo、apoCⅢ1.2、apoCs及可能的apoA-Ⅲ;由IEF电泳,发现除apoCⅢo为单一条带外,其余的都含有几条带,即都具有数种pl不同的多态形。鸭血清VLDL中主要含四种水溶性的载脂蛋白,经SDS-PAGE鉴定,发现其中三种属apoC族载脂蛋白,而另一种则是分子量为65000 Dalton左右的蛋白组分。 将经HPLC分离纯化的鸭血清HDL中的主要载脂蛋白apoCⅢ、apoA-Ⅰ进行蛋白质序列测定,首次测定了鸭血清apoCⅢ的一级结构,其含79个氨基酸(aa),与目前国际上唯一已测出的人apoCⅢ比较,二者在氨基酸序列上差异很大,说明鸭与人进化关系上相距很远及apoCⅢ是一种突变率较高的载脂蛋白。用Chou和Fasman方法在一级结构基础上推测其形成α-螺旋和β-折叠二级结构的情况,发现鸭与人二者的apoCⅢ在二级结构上却比较相似,表明二者应具有相似的生物功能。同时也提示在判断蛋白质间的同源关系时,特别是在进化关系相距很远时,依据其二级结构上的异同,较之比较其一级结构aa序列上的差异,更能体现结构与功能的关系。对鸭apoA-Ⅰ N-端23个aa序列进行了测定,经分析计算,发现该23个aa区域具有较强的形成双性α-螺旋结构的能力,初步提示这可能在一定程度上与鸭LCAT酶活性较高有关。 用CNBr将鸭apoA-Ⅰ和apoCⅢ进行裂解,研究其生物功能区域。经HPLC分离