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肝细胞癌(Hepatocellularcarcinoma,HCC)是消化道肿瘤中的常见类型之一。在HCC中肿瘤细胞的形成与肝前体细胞(Hepaticprogenitorcells,HPC)密切相关。HPC的早期发展阶段会出现特异性的分子标记物:细胞角蛋白19(Keratin19,K19)。K19阳性的HCC具有早期转移、低度分化分化与高侵袭性等生物学特性。现有对K19的研究中指出,在K19表达过程中会出现P53、P65、1KB α以及1KB β等一系列蛋白的变化。而以上蛋白被认为是调控NF-κ B通路的重要蛋白。同时我们也注意到,在HCC临床病例的研究中大部分均出现端粒酶逆转录酶启动子(Tclomcrasc reverse transcriptasc,TERT)的突变。有研究指出端粒蛋白家族成员之一抑制/激活蛋白(repressor/activatorprotein,RAP1)可同时在TERT与NF-κ B通路中起重要调控作用。我们通过对HCC细胞系转染来调控K19表达,对转染后的细胞进行功能学实验来观察K19对HCC细胞产生的影响。此外我们对RAP1进行下调转染,在观察RAP1对HCC细胞产生影响的同时检测是否RAP 1可以对K19产生调控作用。对转染细胞进行western-blot实验,检测相关蛋白的表达水平,明确K19在HCC中的调控机制。对免疫缺陷鼠进行移植瘤模型与血行转移模型的建立,观察K19在体内对肿瘤产生的影响。[目的]1.明确K19对HCC增殖、侵袭、迁移的影响。2.探究K19调控HCC生物学行为的分子机制。[方法]1.通过对 SMMC-7721 与 HCCLM3 转染 K19shRNA、RAPlshRNA与LVK19对相关基因进行调控。2.通过对转染后的细胞进行增殖、侵袭、划痕实验来明确K19与RAP1对HCC细胞生物学功能的影响。3.通过western-blot实验来检测相关蛋白的表达水平明确RAP1调控K19的分子机制。4.对Balbc裸鼠进行皮下HCC肿瘤的注射建立移植瘤模型,观察K19及NF-κ B通路抑制剂对肿瘤的影响。5.对SCID免疫缺陷鼠进行尾静脉HCC肿瘤的注射建立肝癌的血行转移模型,观察肝脏肿瘤生长情况。[结果]1.K19在HCC中对肿瘤细胞的增殖、侵袭与迁移具有促进作用。2.在HCC中K19可以通过RAP1阻断对肿瘤细胞增殖、侵袭、迁移的促进作用。3.NF-κ B通路是K19的主要调控通路之一。4.K19通过RAP1对P65、P50进行调控,从而对HCC生物学行为产生影响。5.在动物实验中,K19对肿瘤的生长与转移具有促进作用。[结论]1、K19对HCC增殖、侵袭与迁移具有促进作用。2、K19通过NF-κ B通路对HCC的生物学行为进行调控。3、K19通过RAP1对HCC的生物学行为进行调控。4、在体内K19对肿瘤的增殖与转移具有促进作用。