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【目的】1、观察筋脉通对糖尿病大鼠坐骨神经病理形态以及NF-κB蛋白表达的影响。2、观察筋脉通含药血清对高糖培养雪旺细胞超微结构以及NF-κB蛋白及其mRNA表达的影响。【方法】1、在体实验:采用链脲佐菌素(STZ,60mg/kg)一次性腹腔注射Wistar大鼠的方法造模,随机分为模型对照(DM)组、筋脉通小剂量(J小)、中剂量(J中)和大剂量(J大)组及神经妥乐平(Ntp)组,每组各10只。以体重、鼠龄及性别相匹配的正常大鼠10只作为正常对照(Con)组。灌胃16w处死,检测各组大鼠干预前及干预后4w、8w、12w和16w血糖和体重变化,通过光学显微镜和透射电子显微镜观察大鼠坐骨神经病理改变并行形态测量学分析,免疫组织化学染色法测定坐骨神经NF-κB蛋白的表达。2、离体实验:从Wistar乳鼠坐骨神经取材,原代培养并纯化雪旺细胞,S-100蛋白免疫组织化学法进行鉴定。取第3代雪旺细胞,加入不同条件培养基,分为正常对照(Con)组、高糖(Glu)组、筋脉通(JMT)组和神经妥乐平(Ntp)组进行培养,48h后行透射电子显微镜观察雪旺细胞超微结构,采用激光扫描共聚焦显微技术检测NF-κB蛋白表达水平的变化,实时荧光定量PCR技术检测雪旺细胞NF-κB mRNA的表达。【结果】1、在体实验:(1)血糖体重:糖尿病大鼠血糖值均显著高于Con组(P＜0.01),各治疗组血糖在各时间点与DM组相比无明显差异(P＞0.05);治疗组间血糖在各时间点均无明显差异(P＞0.05);干预前后,相同时间点各组大鼠之间的体重无明显差异(P＞0.05)。(2)病理形态:①形态学观察:Con组大鼠坐骨神经形态正常,排列整齐,轴索、髓鞘及雪旺细胞结构完整清晰。DM组大鼠坐骨神经有髓神经减少,排列紊乱,轴索肿胀或皱缩,髓鞘密度不均匀,部分神经髓鞘脱失,雪旺细胞变性,间质胶原纤维增多,血管基底膜增厚。各治疗组大鼠坐骨神经病变程度较DM组减轻。②形态测量学分析:与Con组相比DM组大鼠有髓神经纤维密度、小纤维密度减少,小纤维比率下降,有髓神经纤维平均横截面积、轴索平均横截面积增大,差异显著(P＜0.01);大纤维密度和髓鞘平均横截面积在各组动物间比较无明显差异(P＞0.05)。与DM组比较,各治疗组上述各值均有改善,其中J中组改善显著(P＜0.05)。各治疗组间比较,J大组较J中组有髓神经纤维密度、小纤维比率下降,轴索平均横截面积增大,差异显著(P＜0.05,P＜0.01)。(3)坐骨神经NF-κB蛋白的表达:NF-κB主要表达于雪旺细胞浆及细胞核、部分轴索和血管内皮细胞中,髓鞘表达较弱。与Con组相比,DM组的阳性区域平均面积、积分光密度及平均光密度值显著升高(P＜0.01)。各治疗组上述各值均较DM组降低,其中J中组差异显著(P＜0.05)。J小组平均光密度值较J中组显著升高(P＜0.01);其余各值在各治疗组间比较无明显差异(P＞0.05)。2、离体实验:(1)超微结构:Con组雪旺细胞形态规则,无基底膜包被。Glu组部分细胞无细胞核、剩余细胞核形态不规则,细胞器较少,糖原、脂滴和空泡变性多见;另有一些细胞呈气球样改变,细胞膜不完整。JMT组细胞病理改变较Glu组稍有减轻。Ntp组细胞形态异常较Glu组改善不明显。(2)SC中NF-κB蛋白的表达:Con组NF-κB绿色荧光强度较弱,主要表达于胞浆区;Glu组荧光强度于胞浆区和胞核区表达都较Con组增强;JMT组和Nip组表达都较Glu组减弱,主要表达于胞浆区。与Con组相比,Glu组NF-κB的荧光强度值显著升高(P＜0.01)。JMT组和Nip组均较Glu组显著降低(P＜0.01)。两治疗组间比较无明显差异(P＞0.05)。(3)SC中NF-κB mRNA的表达:与Con组相比,Glu组及各治疗组NF-κB mRNA值均显著升高(P＜0.01)。与Glu组相比,JMT组和Ntp组的NF-κB mRNA值均显著下降(P＜0.01)。两治疗组间比较无明显差异(P＞0.05)。【结论】1、在体实验:空腹单次腹腔注射STZ(60mg/kg)16w,糖尿病大鼠坐骨神经可出现形态结构的病理改变,包括轴索、髓鞘病变等主质成分病变和血管、胶原纤维等间质成分病变,存在有髓神经纤维缺失现象。坐骨神经组织中NF-κB表达水平显著升高。筋脉通可改善糖尿病大鼠坐骨神经病理形态、减少坐骨神经中NF-κB的表达,中剂量组效果最好。2、离体实验:采用组织贴块法,经差速贴壁法结合低浓度胰蛋白酶消化法和G-418进行纯化可成功建立坐骨神经雪旺细胞原代培养模型。高糖环境培养可造成雪旺细胞超微结构的改变,上调雪旺细胞中NF-κB蛋白和mRNA的表达水平。筋脉通含药血清可有效抑制高糖环境培养的雪旺细胞中NF-κB蛋白和mRNA表达,并对其超微结构具有一定的改善作用。