论文部分内容阅读
Cpx(conjugative plasmid expression)是存在于革兰氏阴性菌细胞膜上的双组分调节系统,能够感应外界环境变化,参与细菌细胞膜压力调节,维持细胞膜蛋白稳定性。迟缓爱德华氏菌Cpx的功能未知,本研究开展了如下工作:(1)对表型的影响。利用同源克隆获得LSE40菌株全长2,713bp的cpx基因簇,该Cpx含有编码组氨酸蛋白激酶CpxA、反应调节蛋白CpxR和抑制因子CpxP的基因。利用框内基因缺失突变技术,构建了cpx基因簇缺失突变株Δcpx和cpxR基因缺失株ΔcpxR。在正常培养条件下,两个突变株的生长、运动力、对抗生素的敏感性、自凝集、三型分泌系统(T3SS)输送器蛋白(EseB,EseC,EseD)分泌与野生型相比没有显著变化(P>0.05),cpx的缺失使细菌的菌膜形成能力减弱(P <0.05),而ΔcpxR的菌膜形成没有显著变化(P>0.05);在缺铁和3.5%NaCl的培养条件下,两个突变株的生长无显著差异(P>0.05);在1%H2O2和0.05%SDS培养条件下,两个突变株的生长显著下降(P <0.05)。上述结果表明Cpx参与了迟缓爱德华氏菌对氧化剂和表面活性剂等压力的响应。(2)对毒力的影响。检测了突变株对蓝曼龙(Trichogaster trichopterus)的毒力,浸泡感染结果显示Δcpx和ΔcpxR对蓝曼龙的毒力分别下降1.5倍和3.0倍,肌肉注射感染结果显示两突变株的毒力分别下降7.33倍和4.58倍,两株突变株在鱼体内的生存能力显著下降(P <0.05)。上述结果表明Cpx系统参与了对迟缓爱德华氏菌毒力的调控。(3)对基因转录水平的影响。qRT-PCR结果显示,用1mM H2O2处理迟缓爱德华氏菌LSE40后,cpxR基因的转录水平显著升高(P <0.05),表明H2O2处理可激活迟缓爱德华氏菌LSE40cpxR的表达。cpx和cpxR缺失后,一些涉及抗氧化、蛋白正确折叠、细胞分离等过程的蛋白基因的转录水平与野生型细菌有显著性差异,在cpxR互补株中的表达量又回复到野生型水平,表明CpxR参与对这些基因的调控。