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鸭疫里默氏杆菌（Riemerella anatipestifer,RA）是一种可感染雏鸭、鹅、火鸡等禽类后产生全身性败血症的重要致病菌。本病具有高发病率和高死亡率,广泛分布于世界各地,给养鸭业造成巨大的经济损失。脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）是革兰氏阴性菌细胞壁外膜的主要成分之一,同时在大多数革兰氏阴性菌中是一种重要的毒力因子,能够影响细菌的致病力。本研究用RA脂多糖单克隆抗体对RA血清1型转座子随机突变库进行筛选,获得2株LPS突变株,生物学特性分析和动物免疫保护试验结果表明LPS O-抗原缺失后不仅会导致RA的致病力明显下降,而且还会使RA LPS突变株具有一定的交叉保护力。本研究包括以下2部分内容:一、本研究中,运用间接ELISA方法筛选RA血清1型CH3菌株Tn4351转座子随机突变库,试验结果表明有两株突变株与RA LPS单抗8A9均呈阴性反应,分别命名为RA1067和RA1062。Southern-blot验证突变株RA1067基因组中只有一个转座子插入,序列分析显示转座子插入基因是M949RS01915基因。qRT-PCR检测M949RS01915上下游基因的转录水平,结果显示转座子插入不影响M949RS01915上下游基因的转录水平,表明是M949RS01915基因的失活导致突变株RA1067的生物学特性改变。通过测定该突变株LD50和血液载菌量,结果表明RA1067毒力较野生株CH3显著下降,且易被机体所清除。血清杀菌试验证明RA1067对健康鸭血清的敏感性明显增强。转录组测序结果显示,与野生株相比,RA1067共有19个差异表达基因,且差异表达倍数均大于5倍。qRT-PCR进一步验证有2个基因上调大于3倍,3个基因下调大于3倍,功能分析结果表明上调基因主要参与新陈代谢和生物负调节过程,下调基因主要涉及新陈代谢和催化活性作用,其中编码荚膜多糖合成蛋白CapD的M949RS07580基因下调50倍,可能与荚膜多糖和脂多糖O-抗原合成相关。免疫实验结果表明,RA1067突变株灭活疫苗可以有效保护血清1型WJ4、血清2型Yb2、血清10型HXb2的攻毒,因此RA1067可以作为一株有交叉免疫保护的疫苗候选株。以上结果表明M949RS01915基因参与鸭疫里默氏杆菌脂多糖O-抗原合成和基因的调节作用,且与致病性相关。二、本研究中,根据之前间接ELISA试验的研究结果,获得突变株RA1062。Southern-blot验证突变株RA1062基因组中只有一个转座子插入,对其鉴定后发现突变基因是编码CPBP protease family protein的M949RS01035基因。序列分析结果显示该基因为RA血清1型和10型菌株所特有。Western-blotting试验结果表明RA1062 LPS与CH3相比,O-抗原部分的梯状条带明显缺失。同时RA1062对雏鸭的致病力显著下降、对血清的抵抗力也更为敏感。另外,我们同时制备RA1062灭活疫苗并进行了疫苗的免疫效果评估试验,结果表明樱桃谷鸭经过二次RA1062灭活疫苗免疫后对血清1型（WJ4）、和血清10型（HXb2）强毒攻击产生100%的保护率,对血清2型（Yb2）强毒攻击的保护率也可达到75%。转录组测序结果显示,与野生株相比,突变株有12个基因上调表达,9个基因下调表达。qRT-PCR进一步验证有2个基因上调表达大于5倍,2个基因下调表达大于5倍,其中两个上调基因M949RS07300、M949RS04680和一个下调基因M949RS03025编码的蛋白都是TonB-dependent receptor蛋白。其中编码荚膜多糖合成蛋白CapD的M949RS07580基因下调50倍,可能与荚膜多糖和脂多糖O-抗原合成相关。以上结果表明M949RS01035基因参与鸭疫里默氏杆菌脂多糖O-抗原合成和基因的表达调控,且与致病性相关。