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目的:研究孤独症谱系障碍（autism spectrum disorders,ASD）儿童外周血淋巴细胞MAPK/ERK信号传导通路中丝裂原活化细胞外信号调节激酶激酶（mitogenactivated extracellular signal-regulated kinase kinase,MEK）与细胞外信号调节激酶（extracellular signal-regulated kinase,ERK）的蛋白表达水平,为探索ASD筛查诊断的生物标记物提供理论依据。方法:2019年10月-2021年3月在佳木斯大学附属第三医院招募2.5岁～8岁ASD儿童60例,同期在佳木斯市妇幼保健院招募30例正常儿童作为对照,与病例组相匹配。根据招募纳入前期分组标准,ASD儿童经儿童孤独症评定量表（Children Autism Rating Scale,CARS）评估后,分为轻-中度ASD组和重度ASD组各30例。将轻-中度ASD儿童按照年龄分为A组（n=10,2.5岁～4岁）、B组（n=10,4岁～6岁）及C组（n=10,6岁～8岁）,重度ASD组和对照组均按照性别和年龄与轻-中度ASD组匹配进行分组。无菌条件下采集各组儿童的上肢静脉血5 m L,2小时内采用Ficoll密度梯度离心法提取外周血的淋巴细胞。应用免疫荧光技术及Image-Pro Plus 6.0软件分析各组儿童外周血淋巴细胞磷酸化的MEK（Phospho-MEK,p-MEK）和磷酸化的ERK（Phospho-ERK,p-ERK）蛋白的平均光密度值（Average optical density,AOD）,应用蛋白免疫印迹技术检测各组儿童外周血淋巴细胞中MEK与ERK蛋白的表达。对比分析同一年龄段的三组儿童以及每组儿童组内不同年龄段的AOD值与蛋白表达量。结果:（1）三组之间对比:轻-中度ASD组的p-MEK蛋白AOD值、t-MEK、p-MEK、t-ERK及p-ERK蛋白表达高于对照组（p<0.05）,但p-ERK蛋白AOD值差异不明显（p>0.05）。重度ASD组p-MEK与p-ERK蛋白表达高于对照组（p<0.05）,但p-MEK、p-ERK蛋白AOD值、t-MEK与t-ERK蛋白表达无明显差异（p>0.05）。与重度ASD组相比,轻-中度ASD组的p-MEK与p-ERK蛋白AOD值和t-MEK蛋白表达升高（p<0.05）,但p-MEK、t-ERK及p-ERK蛋白表达无明显差异（p>0.05）。三组间的MEK与ERK的磷酸化水平差异均无统计学意义（p>0.05）。（2）同一年龄段三组之间对比:A组（2.5岁～4岁）,轻-中度ASD组p-MEK蛋白AOD值高于对照组（p<0.05）,但p-ERK蛋白AOD值差异不明显（p>0.05）。重度ASD组p-ERK蛋白AOD值与表达低于对照组（p<0.05）,但p-MEK蛋白AOD值无明显差异（p>0.05）。与重度ASD组相比,轻-中度ASD组的p-MEK与p-ERK蛋白AOD值、p-ERK蛋白表达均升高（p<0.05）。三组间t-MEK、p-MEK、t-ERK蛋白表达差异均无统计学意义（p>0.05）。B组（4岁～6岁）,与对照组相比,两组ASD儿童的p-MEK与p-ERK蛋白AOD值、t-MEK、p-MEK、t-ERK及p-ERK蛋白表达均升高（p<0.05）。与重度ASD组相比,轻-中度ASD组p-MEK与p-ERK蛋白AOD值、t-MEK蛋白表达升高（p<0.05）,p-MEK蛋白表达低于重度ASD组（p<0.05）,但t-ERK与p-ERK蛋白表达无明显差异（p>0.05）。C组（6岁～8岁）,轻-中度ASD组p-MEK蛋白AOD值、t-MEK、p-MEK、t-ERK、p-ERK蛋白表达高于对照组（p<0.05）,而p-ERK蛋白AOD值低于对照组（p<0.05）。与对照组相比,重度ASD组p-MEK与p-ERK蛋白表达增加（p<0.05）,但其余蛋白表达两组间无明显差异（p>0.05）。与重度ASD组相比,轻-中度ASD组p-MEK蛋白AOD值、t-MEK、p-MEK、t-ERK蛋白表达升高（p<0.05）,p-ERK蛋白AOD值与表达量均降低（p<0.05）。（3）三组儿童不同年龄段之间对比:与A组（2.5岁～4岁）相比,对照组B组（4岁～6岁）与C组（6岁～8岁）的p-MEK蛋白AOD值、p-MEK、t-ERK、p-ERK蛋白表达均降低（p<0.05）,但A组与C组间p-ERK蛋白AOD值和t-MEK蛋白表达差异不明显（p>0.05）。对照组C组t-MEK蛋白表达低于B组（p<0.05）,其余表达两者之间无明显差异（p>0.05）。与A组相比,轻-中度ASD组B组p-MEK蛋白表达降低以及t-ERK蛋白表达升高（p<0.05）,C组p-MEK与p-ERK蛋白AOD值、p-ERK蛋白表达降低以及p-MEK和t-ERK蛋白表达升高（p<0.05）。与B组相比,轻-中度ASD组C组的p-MEK与p-ERK蛋白AOD值、p-ERK蛋白表达降低以及p-MEK、t-ERK蛋白表达升高（p<0.05）,三组间t-MEK蛋白表达差异不明显（p>0.05）。与A组相比,重度ASD组B组和C组的p-ERK蛋白AOD值与表达均增加（p<0.05）,三者间t-MEK蛋白表达无明显差异（p>0.05）。与B组相比,重度ASD组C组p-MEK与p-ERK蛋白AOD值、p-MEK和t-ERK蛋白表达降低（p<0.05）。结论:（1）与正常发育儿童相比,轻-中度ASD儿童与重度ASD儿童外周血淋巴细胞p-MEK蛋白与p-ERK蛋白存在过度表达。（2）与4岁～6岁的正常发育儿童相比,轻-中度ASD儿童与重度ASD儿童的外周血淋巴细胞p-MEK与p-ERK蛋白的平均光密度值（AOD）明显升高,而且轻-中度ASD儿童AOD值高于重度ASD儿童,三者之间存在显著差异。（3）可考虑将p-ERK蛋白作为2.5岁～4岁重度ASD儿童筛查、MEK与ERK蛋白作为4岁～6岁ASD儿童筛查、p-MEK与p-ERK蛋白作为6岁～8岁ASD儿童筛查的潜在分子标记物。