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脂多糖(LPS)是引起炎症的刺激源之一,常用于建立炎症模型。前期研究发现5μg/mL的LPS刺激6 h能引起小鼠乳腺上皮细胞(MECs)生长活性及炎性因子分泌发生变化,LPS早期刺激炎症信号通路尚不清楚。为了探明LPS早期刺激MECs免疫炎性关键基因及金英黄归汤(简称金英汤,JYT)对其影响,本研究采用ELISA检测5μg/mL的LPS刺激细胞6 h细胞分泌炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6的分泌量验证细胞早期炎症反应,运用转录组测序技术(RNA-seq)检测LPS刺激细胞后的差异基因,进行GO和KEGG Pathway分析筛选与炎症免疫相关基因,并用实时荧光定量PCR(qPCR)验证部分差异基因相关性,通过siRNA转染技术沉默差异基因中Cxcl1、Ccl2研究其在LPS信号通路中关键靶向,并运用qPCR检测金英汤对Cxcl1、Csf2、Csf3、Ccl2、Met、Birc3、Icam1和Cav1 mRNA的影响。结果显示:(1)5μg/mL的LPS刺激小鼠MECs 6 h,细胞分泌的炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-6都显著或极显著的升高(P<0.05,P<0.01)。(2)通过RNA-seq测序得到差异基因有2 058个,主要参与了594个生物学过程和117条细胞信号通路,通过GO、KEGG Pathway分析筛选得到8个差异基因(Cxcl1、Csf2、Csf3、Ccl2、Met、Birc3、Icam1、Cav1)与MECs炎症免疫密切相关;在LPS刺激后mRNA的变化都表现为上升趋势,qPCR验证结果与转录组测序趋势一致。(3)用Cxcl1 siRNA转染片段转染细胞后,同LPS刺激组相比,显著下调细胞分泌IL-1β的量(P<0.05),能极显著下调NF-κB p65 mRNA的表达量(P<0.01);用Ccl2 siRNA转染片段转染细胞后,同LPS刺激组相比,极显著下调细胞分泌IL-1β和IL-6的量(P<0.01),能极显著下调NF-κB p65 mRNA的表达量(P<0.01)。(4)金英黄归汤能够显著或极显著的下调LPS介导下Cxcl1、Csf2、Csf3、Ccl2、Met、Icam1和Cav1的mRNA表达(P<0.05,P<0.01)。结果提示:(1)在5μg/mL的LPS刺激小鼠MECs 6 h时,能引起细胞发生炎症免疫反应。(2)LPS刺激小鼠MECs后有大量基因发生变化,其中有多个上调的基因(Cxcl1、Csf2、Csf3、Ccl2、Met、Birc3、Icam1、Cav1)与LPS信号通路相关。(3)Ccl2可以影响LPS信号通路中NF-κB p65 mRNA的表达,降低细胞分泌IL-1β或IL-6的含量,Ccl2可能是MECs上LPS介导的信号通路中的关键基因,能为乳腺炎症的防治提供新的思路及实验数据。(4)中药制剂金英汤抑制了LPS早期刺激MECs中Cxcl1、Csf2、Csf3、Ccl2、Met、Icam1和Cav1的mRNA表达,总之,这些结果将为MECs免疫炎性的信号研究提供基础数据,为临床预防LPS所致乳腺炎症性疾病提供理论依据,亦为中药制剂在抗炎方面的前景提供数据支撑。