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多西他赛(docetaxel, DTX)是一种半合成的紫杉烷类抗肿瘤药物,是由欧洲红豆杉属植物浆果紫衫(European yew tree, Taxus baccata)的针叶中提取或半合成的。多西他赛是一种细胞微管解聚抑制剂,其抗癌活性比紫杉醇强2-4倍。其抗癌谱广,适用于多种癌症的治疗包括晚期和转移性乳腺癌、卵巢癌、小细胞肺癌和非小细胞肺癌、头颈癌和前列腺癌等。与其他紫杉烷类化合物如紫杉醇类似,多西他赛显示出低的水溶性。为了临床应用,现有注射剂泰索帝(Taxotere)由高浓度的聚山梨酯80组成。据报道,聚山梨酯80能引起一些不良反应,如超敏反应,限制了多西他赛的临床应用。近年来,聚合物胶束引起了药物制剂研究者的广泛关注。聚合物胶束由两亲性嵌段共聚物在水性介质中自组装形成,疏水性嵌段形成内核,亲水性嵌段构成外壳。聚合物胶束是一种胶体载体,具有多种优势,包括纳米级粒径(在10-100nm范围内),增溶难溶性药物,控制药物释放,延长体内循环时间,逃离网状内皮系统或单核吞噬细胞系统的识别和摄取,EPR效应介导的被动靶向作用。药物分子可通过物理包封、化学键合和静电相互作用等手段承载于聚合物胶束的内核。为了提高多西他赛的溶解度,和避免使用聚山梨酯80,本文制备了多西他赛胶束制剂。本课题选择Pluronic嵌段共聚物作为载体材料,其具有无毒、无免疫原性、生物相容性。此外,据报道,Pluronic嵌段共聚物能抑制P-糖蛋白介导的药物外排作用,逆转药物的多药耐药性,提高药物的活性。其中,Pluronic P123(PEO20-b-PPO70-P-PEO20)具有较高的疏水嵌段比例,期待得到较高的载药量。分别采用物理包封和化学键合方法将多西他赛承载于Pluronic P123聚合物胶束的疏水内核,考察了其体外理化性质,并研究了其体内外抗肿瘤活性,为多西他赛的胶束制剂开发提供了理论依据和实验基础。本课题主要分两部分研究了多西他赛的Pluronic P123胶束制剂,主要的实验方法和结果如下：1.物理包封多西他赛的Pluronic P123胶束制剂的研究薄膜分散法制备物理包封多西他赛的Pluronic P123胶束(简称P123胶束)；以单因素考察结果为基础,进行正交设计实验,优化了P123胶束的制备工艺和处方；为提高稳定性,制备了P123胶束冻干制剂；研究了P123胶束的理化性质包括外观形态、粒径、zeta电位、载药量和包封率；透析法研究了P123胶束在磷酸盐缓冲液(PBS)(pH7.4,0.5%吐温80)中的体外释药行为；四唑蓝比色法(MTT法)研究了P123胶束对人肝癌细胞系HepG2、人肺癌细胞系A549和小鼠黑色素癌细胞系B16的体外抗肿瘤活性；采用接种鼠源B16黑色素瘤的昆明小鼠,考察了P123胶束的体内抗肿瘤活性。高效液相色谱法测定多西他赛的含量,冷冻干燥前,P123胶束的包封率和载药量分别是(92.07+1.77)%和(2.35+0.08)%,冻干后,包封率和载药量均有所降低,分别是(86.34+3.32)%和(2.12+0.09)%。冷冻干燥前后,透射电子显微镜(TEM)观察P123胶束均呈球形或类球形；动态光散射法(DLS)测定P123胶束的粒径,冻干前P123的平均粒径为38.9nm,粒度跨度为9-55nm,冻干后其粒径稍有增大,平均粒径为50.7nm,粒度跨度为22-84nm；冻干前后其zeta电位分别是(-10.56±2.34)mV和(-12.45±3.24)mV；P123胶束的体外释药行为符合Weibull方程模型：lnln(1/(1-y/100))=0.7381nt-1.796(r=0.9935),而多帕菲(?)符合一级动力学模型：1n(100-y)=-0.198t+4.462(r=0.9990)；体外细胞毒性结果显示,P123胶束对HepG2、A549和B16细胞的IC50值分别是(0.34±0.02)μM、(0.44±0.05)μM和(0.49±0.08)μM,均低于多帕菲(?)组相应的IC50值(分别是(0.96±0.05)μM、(0.74±0.02)μM和(0.72±0.10)μM),且均具有显著性差异；体内抗肿瘤活性结果显示,P123胶束的抑瘤率为91.6%,优于多帕菲(?)的76.3%(P<0.01),并降低了药物的毒性。2. Pluronic P123-多西他赛结合物胶束制剂的研究在多西他赛的2’位羟基用丁二酸酐活化成羧基后,多西他赛通过酯键连接到Pluronic P123上得到P123-DTX结合物。P123-DTX结合物的结构用质子核磁共振光谱(1H-NMR)表征。由于其两亲性,P123-DTX结合物能够自组装形成胶束。P123-DTX结合物胶束通过透析法制备而成；研究了P123-DTX结合物胶束的临界胶束浓度、载药量、外观形态、粒径和zeta电位等理化性质；分别在pH值为1.2、5.0、6.8、7.4的PBS和小鼠血浆中研究了P123-DTX结合物胶束的体外释药行为；采用MTT法研究了P123-DTX结合物胶束对人肝癌细胞系HepG2、人乳腺癌细胞系MCF-7和小鼠黑色素癌细胞系B16的体外抗肿瘤活性；采用接种鼠源B16黑色素瘤的昆明小鼠,考察了P123-DTX结合物胶束的体内抗肿瘤活性。与多西他赛原料比较,羧基化多西他赛的1H-NMR谱中清楚地观察到额外出现62.5-2.7处的多重峰,其代表丁二酸酐OCOCH2CH2COOH上质子的化学位移峰,证明羧基化多西他赛的成功合成。与Pluronic P123原料比较,P123-DTX结合物1H-NMR谱中出现一系列新的吸收峰,正好与多西他赛的1H-NMR谱相对应,可知多西他赛成功连接到Pluronic P123上；芘探针荧光光谱法测得P123-DTX结合物胶束的临界胶束浓度为(1.34±0.07)×10-5mol/L：紫外可见分光光度法测得P123-DTX结合物胶束的载药量为(13.69±0.52)%；TEM观察P123-DTX结合物胶束呈现球形或类球形,大小均匀,分散良好,DLS测得其平均粒径为(85.3±1.59)nm,多分散系数为0.267；P123-DTX结合物胶束的体外释药行为是pH敏感的,pH7.4和pH6.8条件下释放很慢,仅3.5和3.7%DTX释放。而随着pH值的降低,药物释放加速,可能由于酯键的pH敏感性。血浆中释药速度更快,这可能由于化学水解和酶解酯键的双重机制；体外细胞毒性结果显示,P123-DTX结合物胶束对HepG2、MCF-7和B16细胞的IC50值分别是(1.14±0.13)μM、(1.44±0.15)μM和(1.68±0.22)μM,均高于多帕菲(?)组相应的IC5o值(分别是(0.66±0.02)μM、(0.54±0.06)μM和(0.83±0.11)μM),这可能由于酯键断裂需要时间,释放的游离药物浓度低于多帕菲(?)；体内抗肿瘤活性结果显示,P123-DTX结合物胶束组肿瘤抑制率高达95.94%,优于多帕菲(?)的79.02%,并降低了药物的毒性。