猕猴桃茎点霉叶斑病初步研究及病毒病毒原检测

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猕猴桃是江西省奉新县大面积种植的特色果树。近年来,在其主栽品种“金艳”上发生了两种新的病害猕猴桃茎点霉叶斑病和病毒病,为了明确其病原种类和进行有效防控,本文对猕猴桃茎点霉叶斑病菌进行分离培养鉴定、生物学特性测定和药剂室内筛选试验,并对猕猴桃病毒病进行了毒原检测,实验结果如下:从奉新县猕猴桃基地金艳品种上多点随机采集48份病叶,采用常规组织分离法进行病菌分离,共获得46个培养性状一致的真菌菌株,这些菌株在人工接种试验中表现出致病性。选择代表性菌株YB-1进行形态和分子生物学鉴定,结果表明其培养性状、分生孢子器和分生孢子形态大小与文献记载的茎点霉属真菌相符,测定的r DNA-ITS和GAPDH序列与Genbank中茎点霉菌Phoma bellidis的对应序列同源性最高,分别为100%和99%,在以r DNA-ITS和GAPDH拼接序列构建的系统发育树上与P.bellidis也聚于同一分支。根据实验结果,确定猕猴桃茎点霉叶斑病病原菌为茎点霉菌P.bellidis。生物学特性研究表明:P.bellidis的最适生长温度为25℃,最适培养基为PDA,p H7或偏酸有利于该菌生长,最佳氮源为牛肉膏,最佳碳源为葡萄糖,24 h全光照有利于该菌生长。采用菌丝生长速率法测定9种药剂对P.bellidis的室内毒力大小,结果表明不同药剂其毒力大小不同。9种药剂42.4%唑醚·氟酰胺、68.75%噁酮·锰锌、430 g/L戊唑醇、60%唑醚·代森联、75%肟菌·戊唑醇、500 g/L异菌脲、75%百菌清、450 g/L咪鲜胺、10%苯醚甲环唑的毒力大小依次为0.537μg/m L、1.399μg/m L、1.809μg/m L、2.689μg/m L、3.018μg/m L、3.111μg/m L、3.119μg/m L、5.510μg/m L、6.135μg/m L,可见42.4%唑醚·氟酰胺的毒力最强,10%苯醚甲环唑的毒力最弱。为明确奉新县金艳猕猴桃病毒病的毒原种类,本研究从3个种植规模较大的果园中随机采集40份疑似病毒病叶片样品,提取叶片总RNA,先进行两种常见病毒猕猴桃A病毒(Actinidia virus A,Ac VA)和猕猴桃B病毒(Actinidia virus B,Ac VB)的检测,结果从40份“金艳”猕猴桃病叶样品中均检测到Ac VA与Ac VB。此后,抽取10份样品进行其他13种少见或新近报道病毒的检测,结果从样品中还检测到猕猴桃属褪绿环斑相关病毒(Actinidia chlorotic ringspots associated virus,Ac CRa V)和柑橘叶斑驳病毒(Citrus leaf blotch virus,CLBV),检出率分别为100%和40%。结果表明,奉新金艳猕猴桃病毒病的毒原有Ac VA、Ac VB、Ac CRa V和CLBV 4种,并且普遍存在病毒的复合侵染现象。
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