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为得到既能直接利用木薯淀粉原料又能发酵高产酒精的菌株,本论文对最佳条件下制备的K氏酵母原生质体与黑曲霉（As3.4309）原生质体进行电融合,最终选育出一株性能稳定、高产酒精的融合子,且摸索出该融合子高细胞密度发酵产酒精的工艺验条件。K氏酵母单倍体制备的最佳产孢培养基为:葡萄糖0.1%,酵母膏0.25%,NaAC·3H2O 1.36%,琼脂2%,用HCl调pH值至6.0左右。在该培养基上28℃培养6d,其孢率为78.34%。K氏酵母原生质体形成与再生的优化条件为:菌龄8h,经0.1%β-巯基乙醇预处理10min及以0.8mol/L甘露醇为稳定剂,用1.5%蜗牛酶30℃下酶解2h,在该条件下K氏酵母原生质体形成率与再生率分别为72.9%、21.6%。黑曲霉其原生质体再生优化实验条件为:菌龄为12h,1.0%纤维素酶+0.5%蜗牛酶+0.5%溶菌酶,30℃下酶解3h,黑曲霉原生质体再生率达4.2%。K氏酵母原生质体与黑曲霉原生质体紫外单亲灭活后电融合条件为:交变电场频率为1MHz,交变电场强度600v/cm,脉冲电场强度10kv/cm,脉冲宽度50μs,脉冲个数为5个。经平板初筛和发酵复筛得到一株性能稳定的融合子AK-2。该融合子的对数生长期为9h～21h。融合子AK-2高细胞密度发酵产酒精工艺条件:融合子的发酵培养基为木薯（最佳粉碎度80目,料液比1:3.5,蒸煮温度100℃,蒸煮时间30min,α-淀粉酶添加量15U/g）,MgSO40.03%, KH2PO40.05%, CaCl20.02%,（NH4）2SO40.25%。融合子发酵条件为:转速150r/min,接种量10%,发酵温度32℃,初始pH值4.5;溶氧控制在50%,通氧时间控制为15h。在最佳的条件下融合子发酵,酒精度达到10.3%（v/v）,细胞密度达到3.4亿/mL（细胞干重为23.8g/L）,比优化前细胞密度和酒精产量分别提高了75.6%和17.4%。10L发酵罐中,融合子AK-2高细胞密度发酵产酒精工艺和K氏酵母传统添加糖化酶发酵产酒精工艺进行比较,发现融合子高细胞密度产酒精能力略低于传统发酵工艺,但糖利用率高,残还原糖含量低,不需要糖化工艺,发酵周期缩短,减少了添加酶的成本,同时糖化和发酵在同一个反应器中进行,设备投资少,能耗降低,在工艺上有较大的优势。