【摘 要】
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杂交是鱼类遗传育种中的重要技术手段。杂交可以使双亲的基因组重新整合,从而导致杂交后代的基因型和表现型发生改变,同时远缘杂交时常伴随着多倍体的出现。本研究中,我们以亲缘关系较远、生物学性状差异较大的鲤科鲤亚科的红鲫(Carassius auratus red var.,2n=100,RCC)为母本、鲤科鮈亚科的稀有鮈鲫(Gobiocypris rarus,2n=50,RM)为父本进行杂交,成功制备了
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杂交是鱼类遗传育种中的重要技术手段。杂交可以使双亲的基因组重新整合,从而导致杂交后代的基因型和表现型发生改变,同时远缘杂交时常伴随着多倍体的出现。本研究中,我们以亲缘关系较远、生物学性状差异较大的鲤科鲤亚科的红鲫(Carassius auratus red var.,2n=100,RCC)为母本、鲤科鮈亚科的稀有鮈鲫(Gobiocypris rarus,2n=50,RM)为父本进行杂交,成功制备了杂交后代-鲫鮈(RR);并对杂交后代鲫鮈的外形特征、繁殖特性以及分子遗传学特性等方面展开了系统的研究。主要研究内容如下:1.在杂交后代鲫鮈的孵化期间,对其胚胎的受精率和孵化率进行统计,结果显示:鲫鮈的受精率为50.3%,孵化率为20.7%。通过尾鳍细胞培养制备染色体和血细胞DNA含量检测的方法,对杂交后代鲫鮈的染色体数目及倍性进行了检测。实验结果表明:鲫鮈的染色体数为125条,是一种三倍体杂交鱼。2.对杂交后代鲫鮈及其亲本的外形特征进行研究分析。结果表明:鲫鮈体色与亲本红鲫一样均为红色,不同于父本的银白色。在可数性状方面,鲫鮈的背鳍条数介于父母本之间,体现了杂交的特征。在可量性状方面,除全长/体长外,鲫鮈其它性状的比例值均与亲本存在显著性差异(P<0.05),在体长/头长方面,鲫鮈的数值大于红鲫;在头长/头高方面,鲫鮈的数值小于红鲫,均体现了鲫鮈相对于红鲫具有头小的特征。对6月龄鲫鮈的性腺结构进行了组织学切片观察,结果发现:雌性鲫鮈的卵巢中包含有各时相的卵母细胞,卵巢结构发育正常;雄性鲫鮈的精巢中存在精细胞。3.对鲫鮈及其亲本5S rDNA的序列进行PCR扩增,在5S rDNA的序列结构及其遗传变异情况方面进行了系统分析。通过PCR扩增,在红鲫基因组DNA中发现存在三种5S rDNA条带,大小为203 bp,340 bp和477 bp;在稀有鮈鲫基因组DNA扩增中存在两条5S rDNA条带,大小为223 bp和440 bp;鲫鮈基因组扩增中也存在三条5S rDNA条带,大小为226 bp,340 bp和477 bp。通过序列比对分析,鲫鮈226 bp的序列与父本稀有鮈鲫的较相似,340 bp、477 bp的带与母本红鲫的较为相似,从而说明了杂交后代鲫鮈的5S rDNA既遗传了稀有鮈鲫的特异性条带,也遗传了红鲫的特异性条带,体现了其杂交特性。4.对鲫鮈线粒体基因组的全长进行PCR扩增,对扩增序列进行拼接及序列结构、进化树进行分析,结果显示:鲫鮈线粒体基因组全长为16590 bp。通过检测发现,鲫鮈的线粒体基因组是由2个r RNA基因,13个蛋白编码基因,22个t RNA基因和2个非编码区(控制区及轻链复制起始区)组成,其中AT含量高于GC含量,且D-loop区中存在AT重复序列。鲫鮈线粒体基因组与母本红鲫的相似度为99.4%,与父本稀有鮈鲫的相似度为82.1%;从线粒体系统进化树可看出鲫鮈线粒体基因组更加偏向红鲫,说明了鲫鮈线粒体基因组遵循母系遗传的特征。5.本研究采用实时荧光定量PCR的方法检测了IGF-1、GHR2基因在鲫鮈及其亲本肝脏组织中的表达情况。分析结果发现,IGF-1、GHR2基因均在红鲫、稀有鮈鲫、鲫鮈中表达,而且在杂交子代鲫鮈中的表达都高于父母本。本研究通过远缘杂交制备的杂交后代-鲫鮈,是一种拥有125条染色体的三倍体杂交鱼,且在外形特征和分子水平上都展现出了遗传性和变异性。该杂交后代的制备为鱼类遗传育种研究提供了全新的实验材料。
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