脱氢酶活性测定水中活体藻含量的研究

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藻类大量繁殖会给人类的饮用水安全带来诸多危害。然而,有关藻类定量分析方法的研究很少见报道,目前尚未有统一的藻类定量分析方法。 脱氢酶作为对生物体极其重要的关键酶,其活性检测作为一个反映微生物活性的指标,被广泛应用于各个领域。但将脱氢酶活性的测定法引入藻类的定量检测中,国内外还未见报道。本学位论文提出以水体中藻类脱氢酶活性值做为水体中藻类含量的指标,通过这方面的研究,建立一种快速、稳定、实用的测定水中活体藻类含量的方法。 首先,本学位论文分析了建立这种新型藻类含量测定方法的意义,并对脱氢酶活性检测法的研究进展及其在环境监测领域的应用作了综述,分析了脱氢酶活性检测法应用于藻类检测的可行性。 其次,本学位论文对TTC-脱氢酶活性检测法应用于藻类检测进行了研究,对实验因素和实验条件如比色波长、萃取剂、萃取时间、pH值、还原剂及其浓度、制作标准曲线和活性检测时的反应时间、水浴温度、终止剂、TTC浓度等对检测方法的影响等进行了研究,以此作为检测步骤优化的依据,总结出使用TTC为人工受氢体的水体藻类含量的检测方法并将之优化,从而建立了利用TTC-脱氢酶活性测定水中活体藻类含量的检测方法。优化后,该方法的最佳测定范围为0.025~6μg TF/mL水样·h,在此范围内标准曲线的回归系数为0.9973,灵敏度为0.00032μg TF/mL水样·h,检出限为0.001μg TF/mL水样·h。 再次,本学位论文对亚甲基蓝-脱氢酶活性检测法应用于藻类检测也进行了研究,对实验因素和实验条件如叶绿素和氧气、pH值、终止剂、活性检测时的反应时间、水浴温度、亚甲基蓝浓度和标定范围对检测方法的影响等进行了研究,以此作为检测步骤优化的依据,总结出使用亚甲基蓝为人工受氢体的水体藻类含量的检测方法并将之优化,从而形成利用亚甲基蓝-脱氢酶活性的水中活体藻类含量的检测方法。优化后,该方法的测定上下限即最佳测定范围为0.12~24μg亚甲基蓝/mL水样·h,在此范围内标准曲线的回归系数为0.9988,灵敏度为0.006μg亚甲基蓝/mL水样·h,检出限为0.06μg亚甲基蓝/mL水样·h。
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