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目的:构建Hyper-IL-6重组腺病毒质粒及作为治疗对照的IL-6重组腺病毒、空腺病毒质粒,进行病毒的包装扩增,并探讨重组腺病毒介导的Hyper-IL-6对大鼠急性肝衰竭的治疗作用及机制。方法:将腺病毒穿梭质粒pAdTrack-Hyper-IL-6以Pme-I酶切线性化后与腺病毒骨架质粒AdEasy-1在BJ5183菌内进行同源重组;经酶切及PCR鉴定构建成功后,以Pac-I酶切Hyper-IL-6重组腺病毒(AdHIL-6)质粒,将线性化的AdHIL-6质粒经脂质体转染293细胞进行腺病毒的包装扩增,以氯化铯密度梯度离心法纯化病毒,同法制备AdIL-6、Ad0重组腺病毒。以D-氨基半乳糖(D-Gal)诱导急性肝衰竭模型,诱导后6h,80只SD大鼠随机分为4组:未感染组、Ad0感染组、AdIL-6感染组、AdHIL-6感染组;每组大鼠又分为A、B两组:A组观察3d,采血进行肝功能指标检测,取肝组织H-E染色观察病理学变化,原位末端标记法(TUNEL法)检测肝细胞凋亡,免疫组织化学法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、Caspase-3在肝组织中的表达;B组留观14d存活率。结果:重组腺病毒质粒经Pac-I酶切后可见3kb和一条约30kb的条带,表明同源重组成功。将线性化的重组腺病毒质粒转染293细胞后于荧光显微镜下可观察到明亮的绿色荧光,收集的病毒液经PCR扩增出IL-6、Hyper-IL-6和AdEasy-1特异性片段。AdHIL-6感染组血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总胆红素(TB)含量及凋亡指数明显低于未感染组、Ad0感染组及AdIL-6感染组(P<0.01),而肝组织PCNA表达明显高于另3组(P<0.01);未感染组及Ad0感染组肝组织坏死严重,Caspase-3极强阳性表达;AdIL-6感染组肝组织病变稍轻,Caspase-3强阳性表达;AdHIL-6感染组肝组织病变明显减轻,Caspase-3表达阳性。观察14d后,未感染组及Ad0感染组大鼠全部死亡,AdIL-6感染组1只存活,AdHIL-6感染组存活3只。结论:成功地完成了3种重组腺病毒(AdHIL-6、AdIL-6、Ad0)的制备;Hyper-IL-6对急性肝衰竭大鼠有明显的促肝细胞增殖及抗肝细胞凋亡效应,能有效改善肝功能及肝组织学状况,提高肝衰竭大鼠的存活率。