目的:中国已进入老龄化社会,且老年痴呆患病率呈逐年上升趋势,这已经严重的威胁了老年人的健康,同时也给患者、患者的家庭和社会带来了巨大的精神与经济的压力。人参作为我国名贵中药材,已有四千多年的药用历史,且具有很好的促智作用。我们在文献报道与前期的研究工作中发现,人参非皂苷部分具有增强学习记忆与治疗老年痴呆的作用,为初步确定该活性组分的结构,进行了本项研究,这会为今后深入研究人参非皂苷部分治疗老年痴呆的活性物质结构奠定基础。方法:(1)首先称取除皂苷后的人参水提物加入水搅拌使之溶解,然后通过离心、超滤、透析、浓缩、冻干后得到人参超滤液Y-1、1K透析外液Y-2与1K透析内液Y-3;(2)水迷宫实验:向大鼠海马区注射Aβ25-35建立老年痴呆模型,然后通过定位导航实验测定大鼠爬上水下平台休息的平均逃避潜伏期(AEL),AEL的长短反映了大鼠水下平台的学习记忆能力;再将水下平台撤去,通过空间探索实验测定大鼠通过水下平台位置的次数;(3)活性组分的纯化:对水迷宫筛选出的活性组分用G-15葡聚糖凝胶柱进行进一步纯化,并绘制洗脱曲线;(4)理化性质研究:对水迷宫实验筛选出的活性组分进行理化性质研究,采用苯酚-浓硫酸法,在490 nm波长下测定对照品与供试品吸收度,计算回归方程,然后将该成分的吸收度带入到方程中计算中性糖含量;采用间羟基联苯法,在525 nm波长下测定对照品与供试品吸收度,糖醛酸含量计算方法与中性糖含量计算方法相同;采用Lowery法,在660 nm波长下测定对照品与供试品吸收度,蛋白质含量计算方法与中性糖含量计算方法相同;(5)纯度与分子量测定:采用高效液相凝胶色谱分析系统,并以牛血清蛋白(66430 Da)、VB12(1355.37 Da)、L-色氨酸(204.23 Da)、蛋白酶抑制剂(6500 Da)、细胞色素C(13000 Da)为对照品制作标准曲线,利用GPC软件计算样品分子量分布;(6)组成糖分析:将活性组分采用PMP-柱前衍生化法制备成柱前衍生物,通过HPLC法测定其组成糖;(7)糖苷键连接方式分析:采用氢氧化钠法制备成部分甲基化样品,再经水解、还原、乙酰化后制备成部分甲基化部分乙酰化衍生物,通过GC-MS测定其糖苷键连接方式;(8)氨基酸分析:水解后制备成2,4-二硝基氟苯作为衍生物,通过高效液相法测定氨基酸组成。结果:(1)水迷宫实验结果:定位导航实验结果显示,Y-1组、Y-3组与模型组比较大鼠的平均逃避潜伏期均显著缩短,其中Y-3组的AEL缩短的更为明显;空间探索实验结果显示,Y-1组与Y-3组大鼠的跨平台次数比模型组明显增加,特别是Y-3组增加的更为显著;(2)对活性组分进行纯化后得1K透析内液A(Y-3A)与1K透析内液B(Y-3B)两部分,其中Y-3A含量大为1K透析内液主要组成成分,根据其洗脱曲线判断Y-3A为人参糖蛋白(3)理化性质研究结果显示,活性成分Y-3A的中性糖含量为19.11%,糖醛酸含量为6.79%,蛋白质含量为51.60%;(4)纯度与分子量测定结果表明,Y-3A为一混合物且分子量分布在400 Da–50000 Da之间;(5)组成糖分析结果表明,Y-3A主要含有7种糖,分别为Man、Rha、GalA、Glc、GlcNAc、GalNAc、Fuc,其种Glc含量最多为51.32%。(6)糖苷键连接方式为,非还原末端由GalA、Glc构成,糖链骨架由(1→2)-连接的Man、(1→3)-连接的Glc与(1→4)-连接的GalNAc/GlcNAc构成,在(1→4,6)–连接的Man的C4或C6位存在分支点;(7)氨基酸分析结果:Y-3A由17种氨基酸组成,其中Arg、Gly、Glu含量最多分别为39.45%、12.48%、10.58%。结论:经过水迷宫实验确定了治疗老年痴呆的活性组分为1K透析内液(Y-3),对其进行进一步纯化表明,Y-3A为其主要成分,通过洗脱曲线判断该成分为人参糖蛋白,对该人参糖蛋白进行理化性质、纯度与分子量测定。对该糖蛋白进行初步的结构分析表明,其含有7种糖,其中葡萄糖含量最多,主链由(1→2)-连接的甘露糖、(1→3)-连接的葡萄糖与(1→4)-连接的葡萄糖酰胺或半乳糖酰胺构成,在(1→4,6)–连接的甘露糖的C4或C6位存在分支点,非还原末端主要以葡萄糖居多,且该糖蛋白中含有17种氨基酸,其中精氨酸、甘氨酸、谷氨酸含量最多。