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背景和目的近期研究发现一类具有独特免疫调节功能的T细胞,在维持机体免疫自稳、调控免疫应答方面起着重要作用,称调节性T细胞(regulatory T cells,Treg cell,简称Treg)。因发现它与自身免疫性疾病的发生和肿瘤的免疫抑制密切相关,近来受到人们的广泛关注,成为各学科研究的热点之一。CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg为目前研究得较为清楚的调节性T细胞的一个亚群,Foxp3蛋白特异性地表达于CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞,是调控其分化、发育的重要转录因子,也是其特异性标志。因对CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg研究较多也较成熟,许多文献中Treg细胞特指CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞,本文中Treg细胞也特指的是CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg。自1995年Sakaguchi等首次提出CD4~+CD25~+Treg的概念以来,愈来愈多的研究和发现证明Treg细胞在生理和病理状态下均具有重要的免疫调节作用,尤其在病理情况下,它与自身免疫性疾病的发生和肿瘤的免疫抑制密切相关,研究发现一方面肿瘤细胞可以产生一系列逃避抗肿瘤免疫反应的机制;另一方面,正常的T细胞中包含有Treg细胞,Treg细胞介导的自身免疫耐受的作用很可能影响着免疫系统对肿瘤抗原的应答,从而影响着肿瘤的发生和发展。已有多项研究发现了肿瘤与Treg细胞的关系,在胃癌、食管癌、肝癌、胰腺癌、乳腺癌等不同恶性肿瘤患者的外周血淋巴细胞和肿瘤浸润淋巴细胞中,存在着CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞比例明显升高,FOXP3表达上调的现象,使机体增强了对肿瘤抗原的耐受能力并抑制机体产生有效的抗肿瘤免疫应答,导致肿瘤患者免疫功能处于低下状态,从而引起机体对肿瘤细胞产生免疫忽视或豁免,在肿瘤的发生发展过程中可能发挥着重要的作用。恶性肿瘤严重威胁着人类的生命与健康,肺癌是最常见的肺原发性恶性肿瘤,近50年来世界各国特别是工业发达国家,肺癌的发病率和病死率均迅速上升,死于癌症的男性患者中肺癌已居首位。目前肺癌已成为全球范围内发病率最高的癌症,也是我国发病率位居首位的难治性肿瘤之一。肺癌的发生、发展及预后与免疫功能密切相关,且多项研究已经发现肿瘤患者的免疫功能常处于低下状态。动物实验发现,,在肺癌模型的外周血及肿瘤组织中Treg细胞比例明显升高,进一步研究显示Treg细胞主要是通过细胞与细胞间接触、分泌抑制性细胞因子等方式发挥免疫抑制效应,从而抑制自身反应性T细胞和辅助T细胞的活化,即对CD4~+和CD8~+T细胞均有抑制作用,抑制机体产生有效的抗肿瘤免疫应答,使肿瘤患者免疫功能处于低下状态,导致恶变细胞逃脱了机体的免疫监视,在肿瘤的发生发展过程中起着不可忽视的作用。放、化疗是常用的肿瘤治疗手段,但放、化疗不仅对肿瘤细胞具有杀伤作用,而且对正常的淋巴细胞亦杀伤,淋巴细胞是机体的主要免疫细胞,淋巴细胞减少会引起肿瘤免疫功能降低,因Treg细胞是淋巴细胞的一个亚型,但它本身可以引起肿瘤免疫耐受导致患者的肿瘤免疫处于抑制状态,由于Treg细胞与肿瘤免疫抑制关系密切,所以Treg细胞与肿瘤化疗是否有关值得进一步的研究探讨。目前尚没有关于Treg细胞与肺癌病人临床分期及化疗关系的研究,本实验通过检测肺癌患者化疗前后外周血Treg细胞的变化,研究Treg细胞与肺癌的临床分期及化疗疗效是否有关,并进一步探讨其临床意义。方法1.收集经病理确诊的初治肺癌病人61例,正常志愿者15例设为对照。2.抽取肺癌患者化疗前及化疗两个周期后(并对化疗两个周期后的治疗进行疗效评价)空腹时的外周静脉血3ml,处理后冻存备用。3.将冻存血去除红细胞后,用荧光标记的单克隆抗体(FITC标记的鼠抗人CD4~+,PE-Cy5标记的鼠抗人CD25~+,PE标记的鼠抗人FOXP3~+)对样本进行染色。4.流式细胞仪检测Treg细胞占CD4~+T细胞的比值。5.实验数据用SPSS13.0软件进行统计学数据处理分析。两样本均数比较用t检验,多个样本均数两两比较采用单因素方差分析,a=0.05为差异有统计学意义。结果1.肺癌患者外周血Treg细胞占CD4~+T细胞的比值(9.28±2.10)%明显高于健康对照组(2.63±1.28)%,且差异有统计学意义(P＜0.01)。2.Ⅲ+Ⅳ期的(12.64±3.38)%明显高于Ⅰ+Ⅱ期(6.84±2.19)%,且差异有统计学意义(P＜0.01)。3.化疗病人测定的结果:3.1治疗有效病例(PR):Treg细胞所占比例化疗后较化疗前降低(化疗前:11.94±2.41,化疗后:9.27±1.64),差异有统计学意义(P＜0.01)。3.2稳定和进展病例(SD+PD):化疗后较化疗前比例却升高(化疗前:12.35±2.83,化疗后:13.46±2.52),差异有统计学意义(P＜0.05)。3.3化疗后不同疗效PR与SD+PD进行统计学分析,结果发现PR的平均比值(9.27±2.64)%较SD+PD(13.46±2.52)%明显降低,差异有统计学意义(P＜0.01)。说明有效的化疗(PR)Treg细胞比值下降,疗效差的(SD+PD)Treg细胞比值不降反而进一步升高。化疗组中疗效稳定和进展病例(SD+PD)Treg细胞比值明显高于治疗有效病例PR。结论1.肺癌患者外周血中Treg细胞占CD4+T细胞的比例较正常人明显升高,且分期越高该比值增加越明显。2.对于化疗病人:化疗有效病例化疗后该比值较化疗前明显下降,疗效差者化疗后该比值较化疗前明显升高。且化疗后疗效差的该比值明显高于化疗有效病例。3.由以上推论Treg细胞比例的改变与肺癌的发生、发展和预后有关。提示:我们可以通过临床监测肿瘤患者外周血Treg细胞水平来为肿瘤早期诊断、评价疗效及监测肿瘤的发展和预后提供依据并为肺癌的免疫治疗提供新的思路。