杂交构树再生体系的建立及形态解剖观察

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本论文以优良构树(Broussonetia papyrifera(L.)Vent)品种——杂交构树叶片和茎尖为外植体,从外植体消毒灭菌、愈伤组织诱导和分化、芽增殖的最佳激素种类和浓度配比及生根培养等方面进行了较为系统的研究,初步建立了杂交构树的再生体系。采用石蜡切片技术对不同类型的愈伤组织、不定芽发育过程的细胞组织学观察,为构树遗传转化研究奠定了理论基础。同时,通过杂交构树和野生构树茎、叶营养器官形态解剖比较,确定了杂交构树的优良性状。本研究主要结果如下:(1)叶片外植体采自温室内扦插苗,最佳消毒方法是70%Alc浸泡20s,无菌水冲洗3次,用0.1%升汞(加吐温80)消毒3min,再用0.5%次氯酸钠消毒5min的二次灭菌法,可成功建立杂交构树无菌培养体系。(2)组培苗叶片、茎尖在植物激素的诱导下能再生形成不定芽;叶片愈伤诱导和芽分化最佳培养基为MS+6-BA2.0+NAA0.1mg/L,以培养20d左右不定芽已展叶的第1~3片的再生能力最强;茎尖不定芽诱导最佳培养基是MS+6-BA0.5+NAA0.1mg/L。(3)再生芽增殖培养,6-BA效果好于KT,以MS+6-BA1.5或2.0+NAA0.1mg/L培养基上增殖系数较高,为4.82和5.56;培养基pH值5.60~6.80,芽均能正常生长,添加30g/L蔗糖对芽增殖生长最有利。(4)添加0.1~0.5mg/LGA3对芽伸长生长具有明显的促进作用,芽增殖系数也显著升高,最佳激素配比为BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L+GA30.5mg/L,芽增殖系数高达8.22,芽长2.94cm;附加活性炭1~3g/L,严重限制了芽的生长;添加低浓度的6-BA芽增殖系数下降,芽伸长明显,可获得壮苗。(5)组培苗生根较难,从生根时间,生根率和根生长状况考虑,以MS附加NAA1.0mg/L生根效果较好,生根率为86.7%,根数量大,长而粗壮,但根的质量不高,不适宜移栽。(6)石蜡切片法研究了不同类型愈伤组织和不定芽发育过程的细胞组织学变化,确定了愈伤在叶片的发生部位,形态发生能力强的愈伤结构以及不定芽起源方式等。(7)番红-固绿和组化两种染色比较杂交构树和野生构树叶片形态结构和内含物的差异,二者茎段通过木材解剖和离析法比较形态解剖和木纤维的区别。
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