Stathmin1是一种在脊椎动物细胞质中普遍存在的磷酸化蛋白,它通过与游离微管蛋白的结合来阻止微管的聚合,或者直接结合微管来加速微管的解聚,从而在微管的调节中起到重要的作用,因此被称为微管不稳定蛋白。微管的动力学重建在许多细胞事件比如细胞分裂、迁移和分化中是必需的,而Stathmin1作为微管调节蛋白对细胞的增殖、侵袭、迁移和分化等具有调节作用。本文初步探索了 Stathmin1在成肌细胞分化过程中的表达水平变化,构建了 Stathmin1 shRNA干扰载体,并检测了干扰Stathmin1表达对细胞迁移的影响,为进一步探究Stathmin1的功能奠定基础。本实验以小鼠发育中不同时期的肌肉组织和可诱导分化的成肌细胞C2C12为材料,首先选取了小鼠胚胎期6.5天、9.5天、12.5天、15.5天和出生后1天、7天、2周、6周的后肢肌肉,分别提取总蛋白和总RNA后,检测在不同年龄段小鼠肌肉中Stathmin1的表达水平。然后以体外诱导小鼠成肌细胞C2C12分化为模型,检测了在分化过程中Stathmin1的表达水平变化。结果显示,在胚胎期10天前,小鼠肌肉中Stathmin1的表达量较低,在胚胎期12.5天和15.5天时达到高峰,在出生后,Stathmin1的表达量又出现下降;在C2C12诱导分化的过程中,处于增殖状态的C2C12中Stathmin1的表达量较高,随分化的程度增加,Stathmin1的表达量下调。小鼠肌肉的发生在胚胎期就开始了,在胚胎期10天形成成肌细胞,开始成肌细胞的分裂和分化,这个过程Stathmin1的表达量升高,当成肌细胞停止分裂只进行分化时,Stathmin1的表达景出现下调,这与体外诱导C2C12分化过程中观察到Stathmin1表达量下下调是一致的。采用RNA干扰技术探讨了 Stathmin1蛋白在细胞迁移中的作用。以小鼠Stathmin1 mRNA为模板,设计shRNA寡核苷酸链,退火连入pDC316-EGFP-U6载体,构建Stathmin1 shRNA干扰载体,酶切鉴定和测序确定连接正确的质粒,构建的 3 种干扰质粒分别为 STMN1/shRNA-Control,STMN1/shRNA1,STMN1/shRNA2。将干扰质粒转染小鼠黑色素瘤细胞B16F10,48h后检测Stathmin1蛋白和mRNA的表达量,检测干扰效果。转染质粒的B16F10细胞,划痕实验检测降低Stathmin1的表达对细胞迁移的影响。结果表明STMN1/shRNA1 和 STMN1/shRNA2 质粒使 B16F10 细胞中 Stathmin1 蛋白表达量分别降低了 81%和70%,mRNA表达量分别降低了 78%和86%,说明两种质粒均能有效干扰Stathmin1的表达,干扰载体构建成功,划痕实验结果显示降低Stathmin1的表达可以引起细胞迁移速度的降低,初步探究了 Stathmin1在细胞迁移中的作用。