背景与目的：大肠癌是一种遗传背景比较突出的恶性肿瘤，大约30%的大肠癌患者有明确的家族史，20%左右有家族聚集性，其中以遗传性非息肉病性大肠癌（Hereditary nonpolyposis colorectal cancer, HNPCC）最为常见，约占全部大肠癌的5%。近年研究表明MMR基因突变与HNPCC发病关系密切。 但是仍有近半数的HNPCC尚不能发现已知的错配修复（mismatch repair, MMR）基因突变。为了更全面地揭示该综合征的遗传学机制，国际上制订了HNPCC临床判别标准，建立了国际HNPCC协作组，针对其分子遗传学机制开展了广泛的研究。Amsterdam标准一直被视为临床判别HNPCC的金标准，然而由于其过于严格，使得一些家系被漏检。为了减少这种漏检，各国学者提出了诸如日本标准、Bethesda等修改标准。目前尚少有对中国人群HNPCC分子遗传学机制进行较系统的研究报告，更缺乏针对中国人种的HNPCC临床判别标准。本组收集了34个HNPCC家系，对其家族史、临床和MMR基因突变规律进行了系统研究。目的在于分析现有HNPCC临床诊断标准的可靠性，探讨家系突变基因筛检方法的可行性和系统研究中国人HNPCC基因突变规律。为建立中国人HNPCC家系遗传资源数据库和进一步了解中国人群 HNPCC致病基因突变谱奠定基础。 材料与方法:1．以先证者为基础调查34个HNPCC家系，这些家系主要分布于我国北方5省市。34个家系均符合日本HNPCC诊断标准，其中21个HNPCC家系符合Amsterdam II标准 [1] ，13个HNPCC家系仅符合日本HNPCC诊断标准 [2] ，而不符合Amsterdam II标准。以同期的120例散发性大肠癌作为对照，分析了HNPCC临床表型特征。2．34个家系中，2个家系未获得遗传学标本，另外6个家系未获得肿瘤组织切片（仅获得外周血白细胞）,均未纳入本组实验。余下26个家系的先证者进行了微卫星稳定性检查。26个家系均符合日本标准，其中19例符合Amsterdam II标准，7例符合日本标准而不符合Amsterdam II标准。对26个家系先证者的石蜡包埋组织进行显微切割，提取肿瘤细胞的DNA。以<WP=9>荧光标记法，选择BAT25、BAT26、D5S346、D2S123及BAT40五个位点，进行微卫星稳定性检测。3．以免疫组化的二步法对26个家系先证者的石蜡组织切片进行hMSH2、hMLH1及 hMSH2基因蛋白表达染色，观察它们的表达情况。4．以377DNA测序仪和荧光标记法对先证者外周血基因组DNA进行hMLH1、hMSH2和hMSH6三个基因的全部外显子测序，按照免疫组化（immunohistochemistry，IHC）和微卫星不稳定（microsatellite instability，MSI）的实验结果的引导分别对26个家系的先证者进行测序。如果测序发现可疑的致病性突变，将在家系其他患者中进行鉴定。本组对4个家系进行了“健康成员”突变基因携带情况的调查。5．按Amsterdam 和HNPCC日本诊断标准收集34个家系（见本研究的第一部分）结合IHC、MSI、MMR检测结果综合分析。结果:1．HNPCC临床表型分析：HNPCC患者确诊时的中位年龄为45.3岁，50岁以前的发病占62.1%，发病高峰年龄为40(50岁，均较散发性大肠癌显著提前（散发性大肠癌为59.7岁）男女比为1.5：1。发病规律均为常染色体显性遗传。34个家系中确诊HNPCC的患者140例，原发癌灶共计154个，肠外癌灶31个（占全部癌灶的20.1%），其中，胃癌13例，占肠外癌的41.9%。在116例大肠癌患者（多原发癌患者，仅统计第一次癌）中，右半结肠癌77例，占66.4%，左半结肠癌39例，占33.6%。同时多原发癌5例，异时多原发癌6例。2．HNPCC 肿瘤组织微卫星不稳定检测情况：26例HNPCC患者肿瘤组织中, 总的微卫星不稳定率为84.62%（22/26），其中高度微卫星不稳定（high frequency microsatellite instability，MSI-H）为80.77%（21/26），低度微卫星不稳定（low frequency microsatellite instability，MSI-L）为3.85%（1/26），微卫星稳定（microsatellite stable，MSS）为15.38%（4/26）；符合Amsterdam标准和符合日本标准的HNPCC家系中,患者的MSI-H的表达率分别为84.21%和80.77%，仅符合日本标准而不符合Amsterdam标准的7个HNPCC家系中，5个发现MSI-H, 若按Amsterdam标准筛检HNPCC，则可能丢漏 19.23% (5/26) HNPCC家系。3．IHC检测结果：21例MSI-H的肿瘤组织中19例出现突变型MMR蛋白表达，1例MSH-L的肿瘤组织出现突变型MMR基因蛋白表达。4例<WP=10>MSS肿瘤组织均未发现突变型MMR基因表达。19例符合Amsterdam标准的家系中，14例以IHC法检出突变型MMR蛋白表达，占73.68 %；7例符合日本标准而不符合Amsterdam标准的家系中，检出6例突变型MMR蛋白表达，占26个家系的23.08%；符合日本标准的26个家系，IHC总检出突变型MMR蛋白表达率为76.92%。4．MMR基因测序结果：10例先证者hMLH1蛋白不表达者进行了hMLH1 基因测序，发现7例突变；9例先证者hMSH2蛋白不表达者进行hMSH2基因测序，发现6例突变；1例先证者hMSH6蛋白不表达者进行hMSH6 基因测序，结果为错义突变；有2例MSI-H表型的先证者，其hMLH1，hMSH2及hMSH6三种MMR基因蛋白表达均未提示突变，但均发现他们存在MMR基因的种系突变。4例表现为MSS的先证者，且hMLH1，hMSH2及hMSH6三种MMR基因蛋白表达均未提示突变，未予测?