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目的:胡桃楸(Juglans mandshurica Maxim.)又名山核桃、核桃楸,为胡桃科胡桃属植物。其根(皮)、枝(皮)、叶和青果皮均具有较好的抗肿瘤作用。目前胡桃楸未在《中国药典》中收载,关于其质量标准和质量评价研究仍不完善。因此本论文首先对胡桃楸中分离得到的主要化合物及其组合的抗肿瘤活性进行了研究,以期为质量评价提供科学依据;进而通过指纹图谱对胡桃楸根、枝、叶和青果皮的质量评价进行了研究,为胡桃楸的应用和质量标准研究提供了科学依据。方法:1.各部位化学成分的表征:利用UHPLC-Q-TOF-MS/MS表征胡桃楸茎枝、根、叶、青果皮中的化学成分。2.主要化学成分的分离鉴定:采用乙醇回流提取胡桃楸茎枝中的化学成分,利用柱色谱进行初步分离、高效液相色谱法进一步分离和纯化,利用MS、NMR等光谱方法对分离得到的化合物进行结构鉴定。3.主要单体成分及成分组的抗肿瘤活性:采用MTT法测定分离得到的单体化合物及其组合对人肝癌细胞(Hep G-2)的增殖抑制率及IC50,采用Compusyn法计算化合物组合的联合指数CI。4.各部位指纹图谱研究:采用高效液相色谱法建立不同产地胡桃楸茎枝、根、叶、青果皮的指纹图谱,并利用SPSS、SIMCA-P软件对所获得的指纹图谱进行聚类分析、主成分分析、偏最小二乘判别分析。5.各部位主要成分含量测定:采用Agilent Poroshell 120 SB-C18色谱柱,以甲酸水(A)-甲酸乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱,流速0.3 m L·min-1,柱温30℃,在检测波长270 nm下测定胡桃楸茎枝与根中逆没食子酸、没食子酸、1,6-二-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖、1,2,6-三-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖、1,2,3,6-四-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖5种成分的含量;在检测波长325 nm、350 nm下测定胡桃楸叶中绿原酸、金丝桃苷和异槲皮苷3种成分的含量以及胡桃楸青果皮中绿原酸含量;以芦丁为对照品采用紫外分光光度法在504 nm波长处测定胡桃楸叶中总黄酮的含量。结果:1.各部位化学成分的表征:分别从胡桃楸茎枝、根、叶、青果皮鉴定了83个、75个、39个和18个化学成分;从胡桃楸4个部位中鉴定的化合物可分为8类,分别为鞣质、有机酸、萘衍生物、蒽衍生物、黄酮、二芳基庚烷、木脂素、糖类化合物。胡桃楸不同部位的化学成分差异较大,其含有的主要成分类型有所不同。茎枝中主要含有没食子鞣质、有机酸和萘衍生物,逆没食子鞣质数量较少;根中主要含有逆没食子鞣质、没食子鞣质、有机酸和萘衍生物,逆没食子鞣质和没食子鞣质的数量均较多;叶中主要含有黄酮、有机酸和萘衍生物,黄酮类化合物数量较多而鞣质类化合物的数量较少;胡桃楸青果皮中主要含有萘衍生物、有机酸和黄酮,萘衍生物数量较多而鞣质类化合物数量较少。2.主要化学成分的分离鉴定:从胡桃楸茎枝中分离得到了含量较大的5个化合物,鉴定为逆没食子酸(1)、没食子酸(2)、1,6-二-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖(3)、1,2,6-三-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖(4)、1,2,3,6-四-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖(5)。3.主要单体成分及成分组的抗肿瘤活性:3.1主要单体成分的抗肿瘤活性:没食子酸、逆没食子酸、1,6-二-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖、1,2,6-三-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖、1,2,3,6-四-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖5个化合物在3.125～100μg·m L-1的浓度下对人肝癌Hep G-2细胞均有不同强度的增殖抑制作用,IC50分别为41.8105、83.3612、244.588、48.6312、49.7917μg·m L-1。3.2成分组的抗肿瘤活性:没食子酸、逆没食子酸、1,6-二-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖、1,2,6-三-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖、1,2,3,6-四-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖以不同比例组合或相同比例组合均具有一定的抗肿瘤活性,成分间相互作用均以拮抗作用为主,结构相似的1,2,6-三-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖和1,2,3,6-四-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖以1:1比例组合时接近加和作用。4.各部位指纹图谱研究:胡桃楸茎枝样品相似度差异较大,以采收期聚为冬春季采收和夏季采收两类,聚类结果与产地无关,说明采收期是影响胡桃楸茎枝质量的重要因素之一,而在东北三省范围内产地对胡桃楸茎枝的质量影响较小或无明显规律。2个采收时间段样品中各成分的含量差异较大,夏季采收样品中各成分的含量明显低于春冬季节采收的样品。在东北三省范围内,胡桃楸根、叶和青果皮样品的相似度多大于或接近0.9,相较于枝,三者质量相对稳定;聚类结果与产地和采收期均无关,说明产地和采收期对胡桃楸根、叶和青果皮的质量影响无明显规律。对于胡桃楸青果皮,采自于东北地区样品与购买于河北地区样品被分为2类,表明两者质量有一定差异。通过PCA和PLS-DA,以VIP值为指标指认了对所采集的不同部位样品质量差异贡献较大的成分,结果表明枝和根样品的差异成分均主要为鞣质,叶样品的差异成分主要为黄酮,而青果皮样品的差异成分主要为萘衍生物和有机酸。5.各部位主要成分含量测定:5.1茎枝和根中5种成分的含量:40批胡桃楸茎枝样品中没食子酸、逆没食子酸、1,6-二-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖、1,2,6-三-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖、1,2,3,6-四-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖5种成分含量分别在0.1386～1.6004、0.0360～0.9559、0.0158～1.1174、0.1120～10.8878、0.1168～9.8768 mg·g-1之间;23批胡桃楸根样品5种成分含量分别在1.0968～4.9590、0.2355～3.6041、0.2995～5.5486、0.3784～17.3004、0.9556～31.3878 mg·g-1之间。5.2叶中3种成分的含量:30批胡桃楸叶样品中绿原酸、金丝桃苷和异槲皮苷3种成分的含量分别在0.266～5.614、0.113～3.774、0.439～6.537 mg·g-1之间;5.3叶中总黄酮的含量:30批胡桃楸叶样品中总黄酮的百分含量在5.01%～23.12%之间。5.5青果皮中绿原酸的含量:23批胡桃楸青果皮样品中绿原酸的含量在0.0104～0.1723mg·g-1之间。结论:1.通过LC-MS表征了胡桃楸根、茎枝、叶和青果皮中的132个成分。主要包括鞣质、有机酸、萘衍生物和黄酮。不同部位化学成分差异较大。2.分离得到的有机酸、鞣质单体及其组合均具有体外抗肿瘤活性,在测试比例和浓度下,各组合主要表现为拮抗和加和作用关系。3.基于指纹图谱的质量评价表明不同采收期胡桃楸茎枝样品质量差异较大;不同采收期和产地(东三省)的胡桃楸根、叶和青果皮样品质量相对较稳定。4.基于指纹图谱的PCA和PLS-DA分析表明鞣质是对胡桃楸根及茎枝样品质量差异贡献较大的成分,黄酮是对胡桃楸叶样品质量差异贡献较大的成分,萘和有机酸是对胡桃楸青果皮样品质量差异贡献较大的成分。