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山楂(Crataegus pinnatifida Bge.var.major N.E.Br.)是我国传统的药食兼用品种,多酚尤其是原花青素类成分是山楂果实的主要活性成分。本研究以山楂多酚为样品,采用HPLC法考察了柱温和流动相变化对保留时间的影响。采用山楂原花青素提取物为样品,优化了硫解反应条件;采用优化的反应条件考察了不同山楂多酚组分的硫解回收率,计算出硫解-HPLC法测定山楂原花青素的硫解回收率即硫解转换系数。主要结果如下: 1.对柱温和流动相变化影响山楂多酚保留规律进行非线性拟合。结果表明,甲醇水或乙腈水溶液条件下,山楂多酚组分保留的容量因子对数与柱温变化之间关系规律都是呈线性的。而山楂多酚组分保留的容量因子对数与流动相变化之间关系规律符合二次多项式,与顶替吸附模型方程相比,相关系数更好,达0.99以上。在18%乙腈条件下,用拟合的方程对山楂多酚的保留时间进行预测,二次多项式方程预测的保留时间与实测值之间相对标准偏差更小,7%以内。 2.对山楂多酚的色谱保留规律考察,开发了一种以甲醇-乙腈-水组成的三元流动相的梯度色谱方法。色谱条件为:色谱柱:Hypersil BDS C18(250mm×4.6mm i d,5μm);温度:35℃;流动相A:500μL/L甲酸水溶液,B:甲醇/乙腈=5∶4含500μL/L的甲酸;梯度程序:(min/B%)0/15,11/15,15/17,16/18,19/20,24/29,31/50,33/80,38/80,40/15,50/15;流速:0.8 mL/min;光电二极管阵列检测器,波长:280 nm;进样量:5μL;峰面积外标法定量。 3.对山楂原花青素的硫解衍生反应条件进行了优化,并对各组分的硫解回收率进行了测定。结果表明,以冰醋酸∶1M盐酸=50∶1(v/v)为原花青素裂解剂,苄硫醇浓度为5%,温度90℃,经60min反应,可以保证山楂中的原花青素能够被彻底降解。原花青素D6、C3、B2、EC、C1、D1、E1、C2、D2、B5、EC-S硫解质量回收率分别为:69.7%、72.3%、81.0%、85.8%、46.5%、61.4%、65.7%、74.3%、63.7%、90.3%、89.7%。 4.以主要各组分占山楂原花青素总量的权重和硫解回收率,计算了硫解转换系数,并据此对实际测定样品的结果进行了校正。结果表明,山楂原花青素硫解转换系数为75.1%。经校正后,山楂及其酿制的新酒PC含量分别为4378μg/g和1457μg/g,平均聚合度为2.0和1.7。 5.对硫解反应结束后的样品在室温放置过程中的稳定性进行了分析。结果表明,反应结束后在室温下至少放置8h以内所测结果都是可靠的。