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第一部分：MALAT1在肝再生过程中调控肝细胞增殖的机制研究目的：本部分研究旨在探讨长链非编码RNA-MALAT1在肝再生过程中调控肝细胞增殖的作用机制。方法：RT-qPCR技术检测MALAT1在小鼠2/3肝切除后肝再生过程中多个时间点肝脏组织中的差异表达,采用TUNEL法检测2/3肝切除后肝再生中的肝细胞凋亡情况。基因沉默-过表达技术干扰和过表达MALAT1, CCK8、EdU检测肝细胞生长增殖的差异,流式细胞分析技术检测肝细胞周期、凋亡的改变。采用RT-qPCR技术和 Western Blotting法检测沉默-过表达MALAT1后β-catenin降解复合物Axin1、APC、GSK-3p和下游靶基因Cyclin D1、C-myc的表达变化。细胞免疫荧光检测沉默MALAT1后β-catenin的表达变化。结果：在MALAT1上调表达的肝细胞中,MALAT1通过加速肝细胞周期进程和减少细胞凋亡,促进了肝细胞增殖。其机制为：上调的MALAT1抑制了Axin1和APC的表达,激活Wnt/β-catenin信号通路,促进了cyclinD1的表达。同时,我们的实验结果显示,在肝再生过程中MALAT1的表达受p53的调控,p53可能是MALAT1的上游调节分子。结论：在2/3肝切除后肝再生过程中,MALAT1通过激活Wnt/β-catenin信号通路加速细胞周期进程、促进肝细胞增殖。针对MALAT1的药物靶向治疗可能有益于促进肝衰竭和肝移植后的肝再生。第二部分：p53和p21动态调控小鼠2/3肝切除后肝再生目的：探讨p53、p21在小鼠2/3肝切除(partial hepatectomy, PH)后肝再生中的动态变化及其对肝再生的调控意义。方法：采用小鼠2/3肝切除模型,术后不同时间点采集血液和肝组织标本。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测肝切后不同时间点血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、白蛋白(ALB)的表达变化。采用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time Polymerase Chain Reaction)、免疫组化、Westtern Blotting检测肝切后不同时间点小鼠肝脏组织中p53和p21 mRNA、蛋白水平表达变化。采用Tunel (TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)免疫组化法检测肝细胞凋亡情况。结果：各组小鼠均顺利完成手术,ALT、AST、ALB术后24h、36h与Oh相比,差异有统计学意义(P<0.01)；ALT术后72h、AST术后48h与0h相比,差异有统计学意义(P<0.05)。与Oh相比,肝组织增殖细胞核抗原(PCNA)指数在术后24h为(10.28+1.08)%(P<0.01)；36h达到最高峰为(44.19±2.83)%(P<0.01)。与Oh相比,肝切后p53表达量最低点在15h (2-ΔΔCT=0.17±0.02, P<0.01),最高点在120h (2-ΔΔCT=1.68±0.36, P<0.05)。 P21在肝切后出现2个表达高峰分别在36h(2-ΔΔCT=3.49±0.24, P<0.01)和120h(2-ΔΔCT=3.52±0.23, P<0.01)。p53和p21蛋白水平与mRNA变化趋势一致。肝切后120h血管内皮细胞p53、p21蛋白免疫组化阳性率高达(98.29±1.57)%和(98.72±1.21)%。结论：小鼠2/3肝切除后,p53、p21动态变化调控肝再生过程。p53、p21有望成为多种肝病及肝叶切除术预后评估的检测指标。