人脐带间充质干细胞对感染状态下人肺泡Ⅱ型上皮细胞功能的影响研究

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目的:  1.探讨感染(铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa,PA)对人肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549)凋亡的影响及人脐带间充质干细胞( Human Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cells,hUCMSCs)对此感染状态下A549细胞的保护作用。  方法:  1.建立人肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549)体外感染模型,分为2组:(1)PA组:PA+A549;(2)对照组:A549+PBS;分别观察A549细胞的形态学改变、细胞存活率及细胞凋亡率。细胞凋亡的形态学改变通过透射电镜观察;细胞存活率通过CCK-8新型细胞增殖检测试剂盒检测;细胞凋亡率通过Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞检测;  2.在人肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549)体外感染模型的基础上,观察hUCMSCs对A549细胞的保护作用,分为2组:(1)PA组:PA+A549+PBS;(2)hUCMSCs组:PA+A549+hUCMSCs;分别观察A549细胞的形态学改变、细胞存活率、细胞凋亡率及SP-A的表达。A549细胞的形态学改变、细胞存活率及细胞凋亡率的检测方法同前,SP-A的表达量通过Western Blot检测。  结果:  1.细胞形态学观察显示,PA组细胞受损明显,胞质出现空泡变性,染色质高度凝集,可见凋亡小体;对照组A549细胞结构完整,细胞膜表面微绒毛丰富,核膜完整,核周间隙结构正常,染色质均一。细胞存活率结果显示:PA组与对照组相比,PA组细胞存活率明显减少[(97.37±2.07)%与(70.35±2.89)%],两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。细胞凋亡率结果显示:PA组与对照组比较,PA组A549细胞凋亡率明显增加[(2.55±0.11)%与(8.63%±0.16)%],两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。  2.细胞形态学观察显示,hUCMSCs组细胞包膜结构完整,核膜完整,核仁明显,核染色质电子密度低,染色质均一,未见凋亡小体;PA组细胞受损明显,胞质出现空泡变性,染色质高度凝集,可见凋亡小体。细胞存活率结果显示:hUCMSCs组与 PA组相比, hUCMSCs组细胞存活率有所增加[(85.69±3.07)%与(70.35±2.89)%],两组比较差异有统计学意义( P<0.05)。细胞凋亡率结果显示:hUCMSCs组与 PA组比较, PA组细胞凋亡率有所下降[(6.34±0.12)%与(8.63±0.16)%],两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。SP-A表达量结果显示:对照组中SP-A的表达较PA组明显增强,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);hUCMSCs组中 SP-A的表达较 PA组增强,两组比较差异有统计学意义( P<0.05)。  结论:  1.感染(PA)促进人肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549)细胞的凋亡。  2.hUCMSCs对感染状态下的人肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549)有保护作用:抑制A549细胞凋亡,促进SP-A的分泌。
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