拟南芥POSF21和ABA受体PYR/PYL蛋白互作及功能分析

来源 :中国科学院研究生院(武汉植物园) | 被引量 : 5次 | 上传用户:houguangyun1981
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ABA (Abscisic acid)是一种含有倍半萜结构的植物激素,在植物各个生长发育阶段都起着重要的作用,也与植物的干旱、盐等多种逆境胁迫应答有关,因而被称为“逆境激素”。随着PYR/PYL/RCARs作为ABA受体的发现,ABA信号途径的研究取得了一系列的进展。然而,ABA作为一种重要的植物激素,具有复杂的信号调控网络,因此建立更完善的信号转导途径,从而全面了解植物的生长发育和胁迫应答具有重要意义。本研究通过筛选拟南芥转录因子cDNA文库获得与ABA受体相互作用蛋白,并选取POSF21作为候选蛋白,进行下一步的研究。利用酵母双杂交、荧光双分子互补的方法进行蛋白相互作用的验证,构建目的基因的突变体及转基因植株,从而分析POSF21蛋白在ABA信号通路中的作用,主要研究内容及结果如下:(1)根据PYR/PYL/RCAR基因的序列特征,将该家族的14个成员分为3类,本研究从PYR/PYLRCAR家族每个类别中挑选1-2个成员,构建DBleu载体进行转录因子cDNA文库筛选,得到若干与ABA受体存在相互作用的蛋白,并选取碱性亮氨酸拉链(Basic leucine zipper, bZIP)类型转录因子POSF21进行下一步的研究;(2)酵母双杂交实验表明,POSF21与PYL1, PYL2, PYL5, PYL13之间存在相互作用,与PYL13的相互作用最强,而且不依赖于ABA;同时也通过荧光双分子互补的方法验证了POSF21与PYL1, PYL2, PYL5, PYL13之间的相互作用;(3)构建POSF21基因的pGFP2载体,转化拟南芥原生质体,进行亚细胞定位研究,发现POSF21定位于细胞核内;(4)用10 μM ABA分别处理12d的野生型拟南芥幼苗1h和6h,发现POSF21基因的表达量分别上升了2.86和1.49倍;通过不同胁迫处理12 d的野生型拟南芥幼苗1h和6 h,发现在4℃处理下,POSF21基因的表达量分别上升了2.31和6.03倍,表明ABA和冷胁迫可以诱导POSF21基因的表达;(5)用不同浓度的ABA处理野生型、转基因以及突变体拟南芥种子,与野生型相比,转基因对ABA超敏感,而突变体则对ABA不敏感;(6)以pUBQ10::GUS为内参基因,pRD29A::LUC为报告基因进行原生质体转化实验,与对照(pGFP2空载体)相比,POSF21-pGFP2能够促进LUC报告基因的表达,表明POSF21在ABA信号通路中起正调控作用;
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