论文部分内容阅读
黄酮类化合物具有清除自由基、抗氧化、抗突变、抗肿瘤、抗菌、抗病毒和调节免疫、防治血管硬化、降血糖等功能,被科学界称为“植物雌激素”。国槐(Sophora japonica L.)槐角中可获得高纯度的槐角异黄酮、槐角黄酮醇和槐角总黄酮,其细胞培养则是生产槐角黄酮类物质的技术基础。本文先以三个不同生长期的国槐种胚为外植体,研究愈伤组织的诱导和细胞悬浮培养,建立不同生长期国槐种胚愈伤组织的培养体系。其次以培养出来的愈伤组织为外植体,在细胞培养过程中添加各种诱导子,建立诱导子促进国槐种胚愈伤组织中异黄酮含量体系。最后采用乙醇浸提法,分别对提取温度、提取时间、乙醇浓度和液料比进行优化,在单因素试验的基础上,设计了L9(34)(4因素3水平)的正交试验,建立乙醇浸提法提取国槐种胚愈伤组织中异黄酮的最佳体系。三个不同生长期的国槐种胚愈伤组织的培养结果表明：种胚Ⅰ、种胚Ⅱ和种胚Ⅲ诱导时间表现为种胚Ⅲ>种胚Ⅱ>种胚Ⅰ,诱导率表现为种胚Ⅱ>种胚Ⅲ>种胚Ⅰ,且种胚Ⅱ的最大诱导率与种胚Ⅲ、种胚Ⅰ差异显著。增殖培养时,三种不同生长期异黄酮的总量表现为：种胚Ⅲ>种胚Ⅰ>种胚Ⅱ,种胚Ⅲ愈伤组织中的异黄酮总量与种胚Ⅰ、种胚Ⅱ差异显著。悬浮培养时,愈伤组织中异黄酮的总量,为种胚Ⅱ>种胚Ⅲ>种胚Ⅰ,且种胚Ⅲ与种胚Ⅰ、种胚Ⅱ差异显著。根据三个不同生长期种胚愈伤组织的诱导时间、诱导率、增殖培养和悬浮培养愈伤组织中异黄酮的总量,选择国槐种胚Ⅱ期进行培养。诱导子促进国槐种胚愈伤组织中异黄酮含量的研究结果表明：MeJA和SA均能促进国槐种胚悬浮细胞中异黄酮含量的积累,但效果不明显,并且MeJA的诱导效果并不优于SA,这与前人的研究结果相悖。在促进国槐种胚悬浮细胞中异黄酮含量的生成还有待进一步探索研究。乙醇浸提法提取国槐种胚愈伤组织中异黄酮的研究结果表明：乙醇浸提法提取异黄酮的最佳工艺条件为：提取温度75℃；提取时间9h；提取乙醇浓度60%；提取的液料比70：1,异黄酮的最大提取量为12.045mg/g。