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目的:整理与升降散有关的医学文献,为升降散防治脓毒症(sepsis)提供理论基础。评价升降散对脓毒血症患者临床疗效研究,同时观察升降散对内毒素刺激血管内皮细胞的影响。
本研究共有三个部分:一文献研究;二临床研究;三实验研究。
文献研究
本研究以升降散方证相关文献研究为主,共收集涉及升降散治疗的古今医籍著作,检索国内各大数据库收录的1989-2007年医学刊物中有关升降散的论文。创建资料库,作为数据统计的资料基础。将资料中记载的病名(中西医诊断)、症状、舌象、脉象等情况进行归类。通过以上的统计,升降散主要的临床应用方证是:发热,烦躁,恶心呕吐,口苦或干,腹胀或食欲不振,便秘,尿黄赤,舌苔黄,舌质红或绛,舌紫暗或有瘀斑,脉数或脉沉,适用于毒热内盛证和瘀毒内阻证。
临床研究
Sepsis患者54例,采用随机方法,将病人分为中药升降散组和对照组,中药组共28例,对照组26例。治疗组在对照组基础上给予升降散口服或鼻饲,疗程为7天。观察治疗前后症状、APACHEII评分、体温、白细胞总数、中性粒细胞百分数、CRP、TNF-α水平变化。结果:治疗前两组患者的症状及APACHEII评分无明显差异(P>0.05);治疗七天后与治疗前相比较,两组症状及APACHEII评分均有所下降(P<0.01);中药组患者壮热、恶寒、咽痛、APACHEII评分下降幅度大于对照组(P<0.05)。治疗前两组的白细胞、中性粒细胞计数无明显差异(P>0.05),治疗后第七天与治疗前相比较,两组白细胞、中性粒细胞计数均有所下降(P<0.01),中药组和对照组相比,两组白细胞、中性粒细胞计数水平无明显差异(P>0.05)。治疗前两组TNF-α、CRP水平无明显差异(P>0.05),治疗后第七天与治疗前相比较,两组患者TNF-α、CRP均有所下降,中药组(P<0.01),对照组(P<0.05);中药组和对照组相比,两组TNF-α水平无明显差异(P>0.05)。中药组CRP下降大于对照组(P<0.05)。结论:升降散能够显著改善临床症状。降低血液中白细胞总数、中性粒细胞百分数、CRP、TNF-α水平,其降低促炎因子分泌的作用可能是其防治sepsis的重要机制之一。
实验研究
方法:将人脐静脉血管内皮细胞ECV304进行体外培养。四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测升降散对ECV304细胞毒性;ELISA法测细胞培养液中ET-1水平;硝酸还原酶法测细胞培养液中NO水平;化学比色法测细胞培养液中NOS及iNOS水平;采用流式细胞仪测定细胞周期及细胞凋亡。
结果:升降散IC50为39.37mg/mL。与LPS对照组比较,升降散组ET-1水平明显下降(P<0.01);升降散组细胞培养液中NO,NOS及iNOS水平明显下降(P<0.05或P<0.01)。细胞周期显示空白细胞组G0/G1期占44.68%,而S期细胞占33.89%及G2/M期细胞占21.43%:LPS细胞组G0/G1期细胞占50.62%,而S期占29.94%及G2/M期占19.44%;升降散30mg/mL组G0/G1期细胞占45.35%,S期细胞占33.09%及G2/M期细胞占21.57%。LPS组细胞凋亡率占14.34%,空白组胞凋亡率占4.2%;升降散5mg/mL、10mg/mL、30mg/mL组细胞凋亡率分别为9.74%、8.17%、5.02%。
结论:升降散在体外能够抑制LPS诱导血管内皮细胞分泌ET-1、NO、NOS及iNOS,促进细胞分裂增殖、可明显拮抗LPS诱导的血管内皮细胞凋亡。