升降散对内毒素刺激培养血管内皮细胞的影响及对脓毒症干预作用研究

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目的:整理与升降散有关的医学文献,为升降散防治脓毒症(sepsis)提供理论基础。评价升降散对脓毒血症患者临床疗效研究,同时观察升降散对内毒素刺激血管内皮细胞的影响。 本研究共有三个部分:一文献研究;二临床研究;三实验研究。 文献研究 本研究以升降散方证相关文献研究为主,共收集涉及升降散治疗的古今医籍著作,检索国内各大数据库收录的1989-2007年医学刊物中有关升降散的论文。创建资料库,作为数据统计的资料基础。将资料中记载的病名(中西医诊断)、症状、舌象、脉象等情况进行归类。通过以上的统计,升降散主要的临床应用方证是:发热,烦躁,恶心呕吐,口苦或干,腹胀或食欲不振,便秘,尿黄赤,舌苔黄,舌质红或绛,舌紫暗或有瘀斑,脉数或脉沉,适用于毒热内盛证和瘀毒内阻证。 临床研究 Sepsis患者54例,采用随机方法,将病人分为中药升降散组和对照组,中药组共28例,对照组26例。治疗组在对照组基础上给予升降散口服或鼻饲,疗程为7天。观察治疗前后症状、APACHEII评分、体温、白细胞总数、中性粒细胞百分数、CRP、TNF-α水平变化。结果:治疗前两组患者的症状及APACHEII评分无明显差异(P>0.05);治疗七天后与治疗前相比较,两组症状及APACHEII评分均有所下降(P<0.01);中药组患者壮热、恶寒、咽痛、APACHEII评分下降幅度大于对照组(P<0.05)。治疗前两组的白细胞、中性粒细胞计数无明显差异(P>0.05),治疗后第七天与治疗前相比较,两组白细胞、中性粒细胞计数均有所下降(P<0.01),中药组和对照组相比,两组白细胞、中性粒细胞计数水平无明显差异(P>0.05)。治疗前两组TNF-α、CRP水平无明显差异(P>0.05),治疗后第七天与治疗前相比较,两组患者TNF-α、CRP均有所下降,中药组(P<0.01),对照组(P<0.05);中药组和对照组相比,两组TNF-α水平无明显差异(P>0.05)。中药组CRP下降大于对照组(P<0.05)。结论:升降散能够显著改善临床症状。降低血液中白细胞总数、中性粒细胞百分数、CRP、TNF-α水平,其降低促炎因子分泌的作用可能是其防治sepsis的重要机制之一。 实验研究 方法:将人脐静脉血管内皮细胞ECV304进行体外培养。四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测升降散对ECV304细胞毒性;ELISA法测细胞培养液中ET-1水平;硝酸还原酶法测细胞培养液中NO水平;化学比色法测细胞培养液中NOS及iNOS水平;采用流式细胞仪测定细胞周期及细胞凋亡。 结果:升降散IC50为39.37mg/mL。与LPS对照组比较,升降散组ET-1水平明显下降(P<0.01);升降散组细胞培养液中NO,NOS及iNOS水平明显下降(P<0.05或P<0.01)。细胞周期显示空白细胞组G0/G1期占44.68%,而S期细胞占33.89%及G2/M期细胞占21.43%:LPS细胞组G0/G1期细胞占50.62%,而S期占29.94%及G2/M期占19.44%;升降散30mg/mL组G0/G1期细胞占45.35%,S期细胞占33.09%及G2/M期细胞占21.57%。LPS组细胞凋亡率占14.34%,空白组胞凋亡率占4.2%;升降散5mg/mL、10mg/mL、30mg/mL组细胞凋亡率分别为9.74%、8.17%、5.02%。 结论:升降散在体外能够抑制LPS诱导血管内皮细胞分泌ET-1、NO、NOS及iNOS,促进细胞分裂增殖、可明显拮抗LPS诱导的血管内皮细胞凋亡。
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