金银花水煎液以及联合头孢他啶对绿脓杆菌生物膜作用的体外研究

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目的:1、探讨金银花水煎液在体外抑制绿脓杆菌(PA)形成生物膜(biofilm,BF)的能力。2、研究金银花水煎液在体外对绿脓杆菌BF的破坏能力及与头孢他啶(CAZ)的协同杀菌效果。方法:采用完全随机设计。1、观察药物对绿脓杆菌BF抑制作用的实验方法:以聚氯乙烯吸痰管作为BF载体,严格控制实验条件并在同等条件下制作绿脓杆菌体外BF模型共18份,随机等分为三组,分别为空白对照组,金银花组和红霉素(EM)组,金银花及EM从开始制作BF模型时即分别加入绿脓杆菌悬液中,所用浓度对绿脓杆菌无杀灭作用,7天后计数载体表面粘附的活菌数并在电子扫描显微镜(SEM)下观察BF的形成情况,与空白对照组对照,以明确金银花和EM是否具有抑制绿脓杆菌形成BF的能力。2、观察药物对绿脓杆菌BF破坏作用的实验方法:制作绿脓杆菌体外BF模型共152份,将模型随机等分为两组,第一组观察不同药物及其组合对早期BF的作用,第二组观察不同药物及其组合对成熟BF的作用。各组再随机等分为6小组,分别设为空白对照组,头孢他啶(CAZ)组,金银花组,EM组,金银花+CAZ组和EM+CAZ组,空白对照组的观察时间点为0,4,8,24小时,各药物组加药后的观察时间点分别为4,8,24小时,每个小组均于第24小时用SEM观察BF的形成情况。结果:1、观察药物对BF抑制作用的实验中BF载体表面的活菌计数:金银花组和EM组均低于空白对照组(P<0.01),SEM下空白对照组有大量BF形成,而金银花组和EM组几乎不形成BF。2、观察药物对早期BF作用的实验中BF载体表面的活菌计数:金银花组,EM组和空白对照组之间无差别(P>0.05),而CAZ组则低于前述三组(P<0.01);<WP=5>EM+CAZ组和金银花+CAZ组之间无差别(P>0.05),但均低于CAZ组(P<0.05)。SEM下空白对照组有大量BF形成,金银花组和EM组BF较少,但可见较多裸菌粘附于载体表面,EM+CAZ组和金银花+CAZ组中载体表面的BF和裸菌均少。3、观察药物对成熟BF作用的实验中BF载体表面的活菌计数:金银花组、EM组和空白对照组之间无差别(P>0.05),而CAZ组低于前述三组(P<0.01);EM+CAZ组和金银花+CAZ组均低于CAZ组(P<0.01),且金银花+CAZ组低于EM+CAZ组(P<0.05)。SEM下空白对照组有大量BF形成,金银花组和EM组BF形成较少,且金银花组较EM组更少,但两组均可见较多裸菌附着于载体表面,EM+CAZ组和金银花+CAZ组中的BF和裸菌均少。结论:1、金银花能明显抑制绿脓杆菌形成BF,并能抑制绿脓杆菌对固体表面的粘附能力,其抑制效果与EM相当。2、金银花能破坏绿脓杆菌的早期和成熟BF,与EM相比,二者对早期BF的破坏效果相当,而对于成熟BF则金银花的破坏作用更明显。由于以上作用,金银花在体外能增强CAZ对早期和成熟BF内PA的杀菌能力,对于成熟BF,金银花的这种协同效果较EM更明显。
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