变应性鼻炎患者鼻黏膜淋巴细胞亚群分型及表达谱的研究

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目的:采用流式细胞术检测变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)患者和正常人的鼻黏膜组织以及外周血中的淋巴细胞亚群(CD3+T、CD4+T、CD8+T、NK、CD19+B)的比例,并且应用基因芯片的技术研究同一个人的鼻黏膜局部CD8+T淋巴细胞的表达谱与外周血中的CD8+T淋巴细胞的表达谱的差别,研究鼻黏膜和外周血淋巴细胞的功能的差异。初步探讨AR患者鼻黏膜局部免疫功能的改变,为探讨AR的发病机制提供理论依据,为鼻局部黏膜免疫性疾病的研究提供更多的参考。  方法:用鼻黏膜刮匙获取38例AR患者和23例正常人的鼻黏膜组织,并抽取其外周血2ml。采用流式细胞术分别检测其鼻黏膜和外周血中的淋巴细胞亚群(包括CD3+T、CD4+T、CD8+T、NK、CD19+B)分别所占的比例。应用流式细胞分选技术和基因芯片技术检测鼻黏膜和外周血CD8+T细胞的表达谱。  结果:比较同一个研究对象的鼻黏膜和外周血的研究结果发现,鼻黏膜和外周血的淋巴细胞亚群比例差异显著,鼻黏膜和外周血相比较,CD3+T比例增加(t=15.34,p<0.0001)、CD4+T比例降低(t=5.952,p<0.0001)、CD8+T比例增加(t=12.44,p<0.0001)、NK比例降低(t=4.865,p<0.0001)、CD19+B比例降低(t=15.56,p<0.0001),CD4+T/ CD8+T降低,差异具有统计学意义。可见鼻黏膜中CD8+T细胞占的比例较高,而外周血中则是CD4+T细胞占的比例较高。  AR患者和正常人鼻黏膜的淋巴细胞亚群比较,除CD19+B细胞比例增加外,其它各项比例均无明显差异,AR患者和正常人相比较,CD3+T比例差异不显著(t=1.180,p=0.2427)、CD4+T比例差异不显著(t=0.7312,p=0.4675)、CD8+T比例增加(t=12.44,p=0.6933)、NK比例差异不显著(t=0.3964,p=0.6933)、CD19+B比例增加(t=4.363,p<0.0001),差异具有统计学意义。  AR患者和正常人外周血的淋巴细胞亚群比较,CD3+T比例降低(t=2.117,p=0.0391)、CD4+T降低(t=2.367,p=0.0218),差异具有统计学意义,CD8+T比例差异不显著(t=0.2320,p=0.8175)、NK比例差异不显著(t=1.464,p=0.1494)、CD19+B比例差异不显著(t=0.4010,p=0.6902)。  基因芯片分析结果:鼻黏膜同外周血相比 CD8+T细胞在基因水平以及外显子水平差异数目:上调14280,下调8696。其功能主要与细胞增殖和凋亡等代谢途径、信号转导、物质跨膜转运、RNA运输、蛋白质合成、免疫功能、抗原加工和呈递等有关。目前分析发现其功能差异涉及JAK-STAT通路等的改变。  结论:  5.1、同一个研究对象中鼻黏膜和外周血的淋巴细胞亚群存在很大差异,和外周血相比,CD3+T比例增加,CD4+T比例降低、CD8+T比例增加、NK比例降低、CD19+B比例降低,CD4+T/ CD8+T降低。  5.2、变应性鼻炎患者鼻黏膜淋巴细胞亚群中CD3+TT细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、NK细胞比例较正常人未见明显改变,CD19+B细胞较正常人显著升高。  5.3、变应性鼻炎患者外周血细胞亚群中CD3+T细胞、CD4+T细胞比例较正常人降低,CD8+T细胞、NK细胞比例较正常人未见明显改变。  5.4、流式细胞术的检测鼻黏膜的淋巴细胞亚群比例以及流式细胞分选鼻黏膜和外周血淋巴细胞进行表达谱分析,是一种新的研究鼻黏膜免疫机制的手段。  5.5、同一个研究对象的鼻黏膜和外周血CD8+T细胞功能存在显著差异,其功能差异主要涉及细胞增殖和凋亡的代谢途径、信号转导、物质跨膜转运、RNA运输、蛋白质合成、免疫功能、抗原加工和呈递及JAK-STAT通路等改变。通过对鼻黏膜淋巴细胞表达谱的研究,为鼻黏膜局部免疫功能的研究提供参考。
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