【摘 要】
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目的:通过膀胱灌注观察慢病毒转染膀胱的效果并确定能取得较好转染效果的病毒量;制备豚鼠糖尿病膀胱病变(Diabetic cystopathy,DCP)模型,经尿道膀胱灌注干细胞白血病基因(SCL
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目的:通过膀胱灌注观察慢病毒转染膀胱的效果并确定能取得较好转染效果的病毒量;制备豚鼠糖尿病膀胱病变(Diabetic cystopathy,DCP)模型,经尿道膀胱灌注干细胞白血病基因(SCL基因)慢病毒,观察其转染效果并检测SCL的表达。为进一步探究DCP的临床治疗奠定基础。方法:1.豚鼠经尿道灌注及静脉注射不同量的携带绿色荧光的慢病毒,饲养7d后取膀胱、肝、肺、肾等组织冰冻切片,激光共聚焦显微镜下观察各组织绿色荧光的分布;确定能取得较好膀胱转染效果且膀胱外组织无明显绿色荧光分布的病毒量。2.通过单次腹腔注射链脲佐菌素构建豚鼠DCP膀胱模型,筛选15只分为两组(12/3只)用于进一步实验;实验组豚鼠经尿道灌注SCL慢病毒,分别于灌注结束后第2d、7d、14d、28d取膀胱组织,设空白对照组不予处理直接取膀胱组织;组织冰冻切片后在激光共聚焦显微镜下观察绿色荧光的分布,q RT-PCR法检测SCL基因的表达,并比较各组间是否存在差异。结果:1.滴度为4×108TU/ml的慢病毒,经尿道膀胱灌注30μl量时可见膀胱组织黏膜下有绿色荧光、40μl量时组织肌层有广泛绿色荧光分布、50μl量时组织肌层有更强绿色荧光分布,静脉注射25μl量时膀胱组织肌层可见有广泛绿色荧光分布;经尿道灌注下除50μl量外其余各剂量下膀胱外组织未见明显绿色荧光分布,静脉注射下在肝、肺等组织可见较膀胱更强绿色荧光。2.两月龄荷兰种豚鼠60只筛选出DCP模型23只;经尿道膀胱灌注SCL慢病毒2d后,膀胱组织未见明显绿色荧光,SCL基因RNA水平轻度增高;7d、14d后,组织全层可见明显绿色荧光,SCL表达明显增高;28d后,可见较淡绿色荧光持续存在,且SCL水平仍高于正常水平。结论:慢病毒载体可以成功介导SCL基因转染豚鼠DCP膀胱,并能实现其稳定表达,有可能为DCP的临床治疗带来新的研究方向和手段。
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