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目的:通过构建血管紧张素转化酶2(ACE2)慢病毒表达载体,研究ACE2对Mas受体(MasR)、血管紧张素II 1型受体(AT1R)的表达及ERK1/2、STAT-3蛋白磷酸化水平和平滑肌细胞(VSMCs)迁移的影响,初步探讨ACE2与MasR、AT1R的相互作用关系以及对VSMCs迁移影响及机制。方法:1.构建ACE2慢病毒表达载体:将从小鼠肾脏扩增出小鼠ACE2基因全长cDNA,通过PCR、酶切、连接等分子生物学方法将其连接到pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP-Puro载体,通过酶切和测序鉴定,成功构建小鼠ACE2基因的真核表达载体pCDH-ACE2,并通过荧光观察、Western blot和qPCR检验重组载体在VSMCs中的表达。2.确定A779、Ang-(1-7)、AngII干预时间:以终浓度为10-6 mol/L的A779、10-6 mol/L的Ang-(1-7)、10-7 mol/L的AngII,分别处理VSMCs,在处理时间达到0、4、6、8、10、12、24 h后,收集细胞以Western blot检测ACE2、MASR、AT1R的蛋白表达水平。3.将SD大鼠主动脉VSMCs分成以下9个实验组进行处理:⑴空白对照(Control)组;⑵对照质粒包装慢病毒感染组(Lentiviral-GFP,LV-GFP);⑶重组ACE2表-2-达载体包装慢病毒感染组(Lentiviral-ACE2,LV-ACE2);⑷LV-ACE2+血管紧张素(Ang)II组;⑸LV-ACE2+AngII+A779组;⑹LV-ACE2+A779组;⑺AngII组;⑻Ang-(1-7)组;⑼Ang-(1-7)+A779组。干预后细胞进行:⑴用Western blot检测MasR、AT1R、STAT3、ERK1/2的蛋白表达水平及STAT3和ERK1/2蛋白的磷酸化水平;⑵Transwell检测细胞迁移水平。结果:1.LV-ACE2感染VSMCs后,提高了Mas R的m RNA和蛋白水平,并同时降低了AT1R的蛋白水平。2.AngII处理VSMCs同时增加了MasR及AT1R的蛋白表达量;MasR抑制剂A779降低了MasR蛋白表达量并提高了AT1R表达水平;Ang(1-7)处理在4-6 h之间升高了Mas R的表达量并同时降低了AT1R的表达量。3.LV-ACE2组、LV-ACE2+AngII组、LV-ACE2+AngII+A779组、Ang-(1-7)组MasR蛋白表达较LV-GFP组高(P值均<0.05)。4.LV-ACE2组和Ang-(1-7)组AT1R的蛋白表达较LV-GFP组低(P值均<0.05);AngII组AT1R的蛋白表达显著高于LV-GFP组(P值<0.05)。5.LV-ACE2组和Ang-(1-7)组STAT3及ERK1/2蛋白磷酸化水平较LV-GFP组低(P值均<0.05);AngII组STAT3及ERK1/2蛋白磷酸化水平显著高于LV-GFP组(P值均<0.05)。6.LV-ACE2组、LV-ACE2+AngII组、LV-ACE2+AngII+A779组、LV-ACE2+A779组、Ang-(1-7)组的VSMCs迁移能力显著低于LV-GFP组(P值均<0.05);AngII组VSMCs迁移能力较LV-GFP组高(P值<0.05)。结论:1.LV-ACE2感染VSMCs可以增加MasR的表达,抑制AT1R的表达、下游信号通路上的STAT3、ERK1/2蛋白磷酸化水平以及细胞的迁移能力,且这一作用可被Ang-(1-7)拮抗剂A779抑制,Ang-(1-7)抑制STAT3、ERK1/2蛋白磷酸化水平这一作用也被Ang-(1-7)拮抗剂A779抑制。2.AngII处理VSMCs同时增加MasR及AT1R的蛋白表达量及AT1R下游信号通路上的STAT3、ERK1/2蛋白磷酸化水平以及细胞的迁移能力。3.当LV-ACE2、AngII共同干预VSMCs时MasR的表达增加,而AT1R的蛋白表达量降低及AT1R下游信号通路上的STAT3、ERK1/2蛋白磷酸化水平以及细胞的迁移能力均降低。4.ACE2可以通过增加MasR受体,抑制AT1受体并干扰其下游信号通路上的STAT3、ERK1/2蛋白磷酸化水平,实现抑制VSMCs迁移的作用。