论文部分内容阅读
目的建立一种简单可靠的软骨细胞体外分离和纯化的方法。方法将2只幼龄新西兰兔心脏空气栓塞处死后,无菌操作下取得髂嵴部位的软骨块,修剪成1～2mm2组织块,经0.1%透明质酸酶、0.25%胰蛋白酶和0.1%Ⅱ型胶原蛋白酶三步法消化滤过后获得软骨细胞悬液,再经台盼蓝染色检测活细胞存活率后,接种到含10%胎牛血清(fetal bovine serum, FBS)细胞培养液的培养瓶中进行原代培养。结果取材兔髂嵴软骨经三步酶消化法后可获得多量的单个软骨细胞,具有良好的细胞活性。结论此方法是一种简单可靠的软骨细胞分离纯化方法,可进一步通过原代培养扩增后用于软骨或生长板损伤修复的各种基础研究。目的建立一种简便可靠的软骨细胞体外原代培养的方法。方法将2只幼龄新西兰兔心脏空气栓塞处死后,无菌操作下取得髂嵴部位的软骨块,修剪成1～2mm2组织块,经0.1%透明质酸酶、0.25%胰蛋白酶和0.1%Ⅱ型胶原蛋白酶三步法消化滤过后获得软骨细胞悬液,接种到含10%FBS细胞培养液的培养瓶和培养板中进行原代培养。倒置相差显微镜下观察软骨细胞生长状态,软骨细胞计数法绘制生长曲线,甲苯胺蓝染色、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色和透射电镜观察鉴定培养的软骨细胞。结果软骨细胞接种后24h基本贴壁生长,向四周伸出伪足,呈梭形、三角形或多角形。培养第3～5天增殖活跃,呈细胞岛样结构,培养第7天增殖渐停滞,呈结节状的铺路石样外观。甲苯胺蓝染色,细胞质呈蓝色,伴深蓝色颗粒,长期培养细胞浆严重空泡化,胞浆体积增大,越接近结节中间越明显；Ⅱ型胶原免疫组织化学染色,细胞浆呈淡棕色,伴棕色颗粒；透射电镜下观察,核大居中,细胞浆内线粒体和内质网丰富,部分内质网扩张。结论此方法是一种简便可靠的软骨细胞原代培养方法,培养的软骨细胞具有良好的细胞活性和稳定的特征性生物表型,可进一步用于自体移植重塑修复软骨或生长板损伤的实验研究。目的建立一种简单可靠的动物生长板损伤实验模型的方法。方法将1只幼龄新西兰兔腹腔麻醉后,无菌操作下用针头刺入破坏双侧胫骨近端生长板。阴性对照组未行手术操作。放射学观察生长板损伤和修复情况。结果术后1周,手术组双侧胫骨近端生长板部位呈斑片状模糊样影,为局部炎症表现；术后6周,手术组双侧胫骨近端生长板中央部分骨桥形成。对照组双侧胫骨近端生长板部位呈清晰不透亮线状影。结论此方法是一种简单可靠的动物生长板损伤模型构建的方法,可进一步用于软骨细胞自体移植修复生长板损伤的实验研究。