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黄曲霉毒素B1(AflatoxinB1,AFB1)是一种有毒的次级代谢产物,世界癌症机构将其归类为Ⅰ类致癌物,而作为中国传统发酵食品的酱油却广泛存在不同程度的黄曲霉毒素B1污染。研究表明,即使是痕量的黄曲霉毒素B1,长期的摄入也存在很大的危险性。所以建立一种快速检测AFB1的方法具有重要意义,特别是对于痕量的AFB1样品的检测。通过优化抗体的偶联条件和黄曲霉毒素B1的前处理条件,成功建立了酱油中的免疫磁珠富集方法,结合酶联免疫吸附法(ELISA)定量检测黄曲霉毒素B1。该方法所用的总时间为2h,最佳条件如下：pH7.40.02M PB缓冲液作为偶联体系,抗体与磁珠的比例为55μg/mg,20%的甲醇-PBS作为AFB1的前处理体系。以ELISA作为检测方法,在0.05μg/kg～0.3μg/kg AFB1的范围内具有良好的线性关系(R2=0.9842)。在酱油中添加0.5μg/kg～7μg/kg黄曲霉毒素B1的平均加标回收率为83.6%～104%,相对标准偏差为4.2%～11.7%。同时评价了两种不同方式制备的免疫磁珠在酱油中富集AFB1的效果,分别是直接法和间接法。直接法是抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体直接偶联到磁珠表面所制备的免疫磁珠;间接法是生物素化的抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体偶联到链霉亲和素磁珠表面所制备的免疫磁珠。结果表明,直接法免疫磁珠的抗体偶联率高于间接法免疫磁珠的抗体偶联率,但间接法免疫磁珠在用量更少的条件下,对AFB1回收效果高于直接法的免疫磁珠,特别是对于痕量的AFB1样品。对于含5ng的AFB1酱油样品,直接法的免疫磁珠需要0.5mg的用量,而间接法的免疫磁珠只需要0.3mg用量。免疫磁分离法作为酱油的前处理方法,与传统的有机溶剂萃取法和免疫亲和柱法作了比较。结果表明,免疫磁分离法所用的时间最短,而且AFB1回收率高,特别是对于痕量的AFB1样品。由于免疫磁分离法是基于一种动态的热力学反应过程,相比其它的前处理方式,该方法具有很大的优势。相对于传统的有机溶剂萃取法,该方法具有回收率高、时间短、操作简单、有机溶剂用量少等优点；而相对于免疫亲和柱法,该方法具有成本低、时间短、前处理简单及灵敏度高等特点。通过液相色谱-串联质谱法对ELISA检测结果的验证,说明免疫磁分离法联合ELISA检测AFB1的准确性和可行性。该方法具有快速简便、设备简单、灵敏度高、准确性好、回收率高等优点,可很好地应用于酱油中黄曲霉毒素B1的快速检测,特别是痕量的AFB1的样品。