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第一部分4-HPR联合DDP对卵巢癌细胞株增殖抑制作用的体外实验研究目的：4-羟苯基维胺脂(N-4-hydroxyphenyl retinode,4-HPR)是一种全反式维甲酸的衍生物,实验研究和部分临床实验表明,它对各种肿瘤有化学预防和治疗双重作用；顺铂(cisi-platin,DDP)是卵巢癌常用的化疗药物,但因其毒副作用及其耐药等问题,临床应用受到限制。本研究探讨在体外环境下,4-羟苯基维胺酯(4-HPR)联合顺铂(DDP)对人卵巢癌细胞株SKOV-3增殖及凋亡的影响。方法：4-HPR单药,DDP单药及4-HPR+DDP联合用药方式多种剂量分别干预人卵巢癌细胞株SKOV-3; MTT法检钡SKOV-3细胞增殖抑制率变化；中效原理法判断联合用药的相互作用；HOCHST和流式细胞单染和双染分析凋亡细胞比例。实验结果计量资料以均数±标准差表示。应用SPSS13.0统计分析软件进行t检验,P<0.05被认为差异有统计学意义。结果：MTT检测方法结果：1、两种药物单独使用时均具有剂量依赖性和时间依赖性。2、DDP：药物作用48小时,各相邻药物浓度组之间,只有DDP20μM与DDP10μM浓度组之间有统计学差异(P<0.05)；药物作用72小时,从DDP2.5μM浓度组开始均与相邻药物浓度组之间有统计学差异。3、4-HPR;药物作用48小时,各相邻药物浓度组之间,只有4-HPR20μM与4-HPR10μM浓度组之间有统计学差异；药物作用72小时,从4-HPR10μM至4-HPR20μM浓度组均与相邻药物浓度组之间有统计学差异。4、两种药物联合应用后,根据中效浓度的计算,除4-HPR1μM+DDP5μM在48h的联合应用组外,在其余48h与72h的所有联合应用组,均CI<1,即两种药物联合应用产生了协同作用的效果。HOECHST检测方法：1)DDP与4-HPR在作用SKOV-3细胞株72h后,两种药物单独使用时,均具有剂量依赖性。2)DDP与4-HPR的联合应用,根据中效浓度的计算,4-HPR5μM+DDP组和4-HPR10μM+DDP5μM组均为CI<1,即两种药物联合应用产生了协同作用的效果。流式双染检测法结果：1)DDP与4-HPR在作用SKOV-3细胞株72h后,两种药物单独使用时均具有剂量依赖性。2)DDP与4-HPR的联合应用,根据中效浓度的计算,三组药物联合应用组均为CI<1,即两种药物联合应用产生了协同作用的效果。流式单染检测法：1)DDP与4-HPR联合应用组：DDP通过降低G1期细胞的比例,主要将细胞阻滞在G2期,抑制SKOV-3细胞的增殖,而4-HPR主要将细胞阻滞在S期和G2期。联合应用两种药物的效果综合了两种药物的单独作用效果。结论：SKOV-3细胞在4-HPR5μM+DDP5μM和4-HPR10μM+DDP5μM联合作用72h后,能够产生明显的抑制增殖的作用,且作用协同,其中4-HPR的使用浓度越高,抑制效应越明显。第二部分4-HPR联合DDP对卵巢癌移植瘤增殖抑制作用的体内实验研究目的：建立人卵巢癌皮下移植瘤裸鼠模型,探讨4-HPR和DDP单独应用及联合应用对移植瘤的作用,进一步探讨其作用机制。方法：先培养人卵巢癌细胞株SKVO-3,用细胞悬液接种法制备荷瘤鼠模型1只；再用套管针组织块接种法进行皮下接4-HPR组种,共接种30只裸鼠；观察成瘤情况；分组后腹腔分别给药：(1)对照组：生理盐水；(2)4-HPR组:8mg/kg;(3)顺铂组：3mg/kg;(4)联合用药组：4-HPR8mg/kg,4-HPR给药6小时后给顺铂3mg/kg,均为腹腔注射给药,一次注射剂量为0.2ml,每周两次,共三周。每周测量肿瘤长、短径,计算肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线,取瘤组织进行病理学检查；免疫组织化学S-P法检测瘤组织Caspase-3蛋白的表达；检测细胞凋亡率和细胞周期变化。结果：用2.5×1010个/只细胞悬液接种成功制备荷瘤鼠一只,套管针皮下接种SKVO-3瘤块后,2～3天皮丘消平,约4～5天可见微小的肿瘤结节,接种成功率为100%。治疗结束时测移植瘤体积分别为4937.72±563.28mm3、3726.34±462.32mm3、2687.78±631.91mm3、1532.69±723.84mm3,抑瘤率分别为0.00%、30.21%、42.78%、61.37%。移植瘤体积,各处理组均小于对照组,联合用药组小于单药组,差异均有统计学意义(p<0.05)；肿瘤组织病理：剖视肿瘤,对照组大部分呈类圆形,有的肿瘤可见表面血管,颜色灰白,质地较硬。光镜下见,对照组肿瘤具有恶性肿瘤细胞的一般特性,还具有特征性的腺腔样结构。实验组见不同程度点、片状坏死,并有炎性细胞的浸润,以联合用药组最重。免疫组织化学法检测Caspase-3的变化,对照组、4-HPR组、顺铂组、联合用药组,结果用免疫组化评分(HIS)分别为：2.78±1.33、4.15±0.76、5.22±0.62、6.37±1.25,各组与对照组相比,联合用药组与单药组相比,差异均有统计学意义(p<0.05)。流式细胞术结果显示：对照组、4-HPR组、顺铂组、联合用药组,细胞凋亡率逐渐升高,分别为6.43±2.31%、14.75±4.32%、21.54±1.47%、25.76±3.42%,细胞周期Go/G1期细胞逐渐减少,G2/M期细胞逐渐增多,S期细胞变化不明显。结论：4-HPR对SKVO-3细胞的增殖抑制作用呈时间-剂量依赖关系,4-HPR与顺铂联合应用可增强顺铂对SKVO-3细胞的增殖抑制作用。4-HPR可抑制SKVO-3细胞裸鼠移植瘤的生长,4-HPR与顺铂联合应用抑瘤效果增强。4-HPR可使SKVO-3细胞,细胞周期阻滞于G2/M期,诱导其凋亡,4-HPR与顺铂联合应用诱导SKVO-3细胞凋亡作用增强。4-HPR可通过增加Caspase-3蛋白的表达,增强SKVO-3细胞对顺铂的敏感性。