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目的本实验以大鼠重型闭合性颅脑创伤为模型,检测在海马CA3区中,研究亚低温条件下冷诱导RNA结合蛋白(CIRP)与Caspase-3蛋白的表达变化。在神经损伤后进一步阐述了冷诱导RNA结合蛋白(CIRP)所发挥的作用及亚低温治疗对颅脑损伤的治疗效果。探讨在闭合性颅脑损伤后,亚低温治疗中CIRP对颅脑损伤的保护机制,为闭合性颅脑创伤的临床治疗提供了理论依据。方法1大鼠重型闭合性颅脑损伤模型采用1994年Marmarou等人创立的方法。2将288只Wistar大鼠随机分为假手术组,开颅后立即缝合(Sham)、颅脑损伤组(TBI)和亚低温治疗组(MH),这三组又按时间分为6 h、12 h、24 h和48 h四组,每组/时间点各24只。3 MH组:在TBI组的基础上将大鼠饲养在放有恒定低温实验冰毯上,用肛表查看并调节冰毯温度,使其体温维持在32℃,持续48h。4采用大鼠大体及解剖学观察,观察到大鼠形态和行为变化以及脑组织在损伤后各时间点充血变化;采用免疫组织化学法,通过亚低温治疗后观察在大鼠海马CA3区中CIRP和Caspase-3组织病理学变化和细胞凋亡情况;采用Westren blot法,通过亚低温治疗后观察在大鼠海马CA3区中CIRP及Caspase-3蛋白表达情况。5采用计算机真彩色图象分析系统进行定量分析;数据应用SPSS统计分析软件,对多个样本均数比较用单因素方差分析,均数两两比较用t检验。将Sham组结果设为1,其他各组均于其比较,所得结果表示为(均数±标准差),显著性差异的概率设为0.05即P<0.05认为差异有统计学意义。结果1通过观察发现在32℃时各种情况表现稳定。创伤性颅脑损伤后大鼠蛛网膜下腔均见出血,点状出血多见于脑实质;创伤后脑表面血管充血,所有致伤大鼠均无局灶性脑挫裂伤的表现。从大体解剖学观察判断,该创伤为重型闭合性颅脑损伤,符合本实验创伤性颅脑损伤研究的要求。并观察到随着损伤时间的延长,脑表面血管充血逐渐减少,两组模型对比观察MH组较TBI组脑表面血管褪血较缓慢。2免疫组化结果显示,Sham组中大鼠海马区偶见CIRP阳性细胞,胞浆着色浅淡,阳性细胞以神经元为主,伤后TBI组和MH组胞浆着色均为棕黄或深褐色且着色最深,随着损伤时间的延长着色逐渐见弱,统计CIRP结果显示各时间点MH组较TBI组分别多出10%、9%、6%和5%(P<0.05),Caspase-3结果显示MH组较TBI组分别少于6%、8%、10%和13%(P<0.05)。3 Westren blot结果与免疫组化结果一致,在CIRP中TBI组和MH组均在损伤6h时达到峰值,随着损伤时间延长其蛋白表达逐渐减少,MH组较TBI组各时间点分别多出24%、21%、18%和14%(P<0.05);Caspase-3结果与CIRP完全相反,在损伤初期6h时其表达量最低,随着损伤时间的延长表达量逐渐升高,MH组较TBI组分别少13%、19%、21%和30%(P<0.05)。结论1通过观察发现在32℃时各种情况表现稳定。创伤性颅脑损伤后大鼠蛛网膜下腔均见出血,点状出血多见于脑实质且多位于脑干背侧;创伤后脑表面血管充血充足,所有致伤大鼠均无局灶性脑挫裂伤的表现。从大体解剖学观察判断,该创伤为重型闭合性颅脑损伤,符合本实验创伤性颅脑损伤研究的要求。并观察到随着损伤时间的延长,脑表面血管充血逐渐减少,两组模型对比观察MH组较TBI组退血较缓慢。2免疫组化结果显示,Sham组中大鼠海马区偶见CIRP阳性细胞,胞浆着色浅淡,阳性细胞以神经元为主,伤后TBI组和MH组胞浆着色均为棕黄或深褐色且着色最深,随着损伤时间的延长着色逐渐见弱,统计CIRP结果显示各时间点MH组较TBI组分别多出10%、9%、6%和5%(P<0.05),Caspase-3结果显示MH组较TBI组分别少于6%、8%、10%和13%(P<0.05)。3 Westren blot结果与免疫组化结果一致,在CIRP中TBI组和MH组均在损伤6h时达到峰值,随着损伤时间延长其蛋白表达逐渐减少,MH组较TBI组各时间点分别多出24%、21%、18%和14%(P<0.05);Caspase-3结果与CIRP完全相反,在损伤初期6h时其表达量最低,随着损伤时间的延长表达量逐渐升高,MH组较TBI组分别少13%、19%、21%和30%(P<0.05)。