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瑞香狼毒(Stellera chamaejasme L.,瑞香科狼毒属)是一种多年生草本植物,在我国大部分草原地区广泛分布。瑞香狼毒全草有毒,人接触时会产生过敏性皮炎,家畜误食狼毒后,产生一系列消化系统和神经系统症状,严重时虚脱或惊厥死亡。瑞香狼毒也是传统的中草药,有杀菌、杀虫、散结、逐水祛痰、破积杀虫等功效。对瑞香狼毒化学成分的研究发现其能产生多种活性代谢物,其中黄酮类化合物种类和含量最多。黄酮类化合物是瑞香狼毒毒性和生物活性的主要来源,能够引起动物发生中毒反应,对周边植物生长产生抑制,但同时也具有抗癌、杀虫抑菌等多种药理活性。植物内生真菌是指在其整个生活史的全部或部分阶段生活在健康的植物组织内,不会引起植物发生明显病害的一类真菌。植物内生真菌能够产生与宿主植物相同或相似的次级代谢产物。本研究对采自不同地区的瑞香狼毒进行内生真菌的分离,通过形态学与分子生物学方法进行鉴定,初步分析了不同地区瑞香狼毒内生真菌种属分布的差异,同时对瑞香狼毒内生真菌进行发酵培养,从中筛选出能够产生黄酮类物质的内生真菌。研究结果如下:1.瑞香狼毒内生真菌的分离与鉴定对采自4省5地区的瑞香狼毒内生真菌进行分离,共分离到22株菌,成功鉴定20株,分别属于6纲7目7科10属,包括Coniochaetaceae sp.、Podospora vesticola、Preussia intermedia、Preussia funiculata、Taifanglania sp.、Cladosporium cladosporioides、Cladosporium sp.、Phoma moricola、Plenodomus henersoniae、Leratiomyces laetissimus、Alternaria sp.和Sordariomycetes sp.。22株菌中链格孢属(Alternaria sp.)9株,数量最多,是瑞香狼毒中的优势菌属。除1株粪壳纲菌(Sordariomycetes sp.)和9株链格孢属菌(Alternaria sp.)外,其余内生真菌均是首次从瑞香狼毒中分离得到。2.瑞香狼毒内生真菌发酵产物黄酮检测对瑞香狼毒中分离到的10株菌SC1L6-1、SC3S6-1、SC4L3-1、SC5S1-1、SC6L3-1、SC8L3-1、SC13F1-1、SC16L4-1、SC17L6-1、SY1L2-1进行发酵培养,分别提取各菌株菌液和菌丝总黄酮,薄层层析筛选存在黄酮类化合物的真菌提取物,结果发现,SC1L6-1菌丝提取物、SC1L6-1菌液提取物、SC13F1-1菌液提取物和SY1L2-1菌液提取物中存在黄酮类化合物。分别对各提取物中的黄酮类化合物的类型和含量进行测定。SC1L6-1菌丝提取物含有2种黄酮类化合物,槲皮素和二氢山奈酚,总黄酮含量0.06%,SC1L6-1菌液提取物含有3种黄酮类化合物,槲皮素,3’,14-二甲-4’,11-二甲氧-5,7-二羟基苯骈二氢黄酮和(+)-表枇杷素,总黄酮含量4.60mg/L;SC13F1-1菌液提取物含有2种黄酮类,洋芹素和(+)-表枇杷素,总黄酮含量2.75mg/L;SY1L2-1菌液提取物含有1种黄酮类化合物,狼毒素A(或其同分异构体),总黄酮含量4.45mg/L。