低温胁迫下向日葵转录组测序及HaWRKY23的表达分析

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:cjz8290911
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WRKY转录因子在调控植物多种生物和非生物胁迫反应以及植物生长发育和物质代谢过程中扮演重要角色。本研究基于转录组测序技术,筛选低温胁迫下向日葵(Helianthi annuus)差异表达的WRKY基因(HaWRKYs);对HaWRKY23进行了生物信息学分析并进行亚细胞定位,低温处理后检测了该基因在向日葵不同组织中的表达特性,以及不同激素处理和锈菌侵染后的表达情况;最后对向日葵不同品种进行了抗寒性测定。主要研究结果如下:1.对向日葵进行了4℃低温处理,分别在0、8、24和48h采集向日葵叶片,通过Illumina高通量测序平台对其进行转录组测序,对差异表达的基因进行GO及KEGG分析。在低温胁迫下,不同比较组间共发现了75个WRKY差异表达基因,上调表达69个,下调表达6个;采用q RT-PCR的方法对10个可能参与低温胁迫过程的WRKY基因进行验证,证实了转录组测序结果可靠。2.生物信息学分析结果表明:HaWRKY23编码271个氨基酸,蛋白质分子量为30715.16,理论等电点6.30,蛋白稳定系数为50.33,为亲水性不稳定蛋白,共有36个蛋白磷酸化位点,亚细胞定位预测结果为细胞核,不含有信号肽和跨膜结构域,具有1个保守结构域,保守基序为WRKYGQK。亚细胞定位试验结果显示HaWRKY23定位于细胞核。3.利用qRT-PCR对4℃低温处理后向日葵根、茎、叶中HaWRKY23的表达量进行检测,结果显示,HaWRKY23在向日葵的根、茎、叶组织中均有表达,表达水平为:叶>根>茎。4.对向日葵分别进行SA、JA、ABA处理以及锈菌接种处理,通过q RT-PCR测定HaWRKY23的表达量。结果显示,HaWRKY23在SA、JA和ABA胁迫下均有表达,但ABA对该基因的诱导响应最显著;接种锈菌后HaWRKY23表达呈上调趋势,推测该基因可能也参与了向日葵抗病反应。5.选取6个不同品种的向日葵,通过测定低温胁迫下叶片的相对电导率、丙二醛含量、游离脯氨酸含量和超氧化物歧化酶活性等生理指标比较不同品种的抗寒性。最后通过隶属函数综合分析得出,6个品种的抗寒顺序为LD5009>SH361>甘葵2号>科阳6号>谷丰6号>谷丰288。
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