鸡SUMO底物的制备与活性鉴定

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SUMO (Small Ubiquitin-like modifier)化是一种重要的蛋白质翻译后修饰形式,在体内发挥着非常重要的作用,SUMO可以增强蛋白质的稳定性;近年来还发现SUMO作为一种融合标签可以显著提高一些难溶蛋白的溶解性。SUMO化修饰作为蛋白质翻译后修饰的一种重要形式在体内发挥着非常重要的作用,不仅可以调控蛋白质层面而且对细胞水平也有一定影响,概括起来SUMO化修饰具有以下一些功能:调节蛋白质之间的相互作用、调节转录活性、调节蛋白质的转运、介导细胞信号定位等等,这些功能之间存在着一定的联系性。因此制备SUMO融合蛋白有助于我们进一步阐明SUMO家族蛋白翻译后修饰的机制,为以后的实际应用提供理论依据和基础。利用SUMO融合表达系统表达重组蛋白,在分离靶蛋白的过程中,必须使用SUMO蛋白酶作为切割工具,因此,以商品化为目的大量表达高活力和高特异性的SUMO蛋白酶活性片段具有十分重要的经济意义和市场价值。目前商业化的SUMO底物蛋白价格昂贵,操作流程复杂,因此本研究构建了SUMOs-GST,6×His-SUMOs-GST,6×His-SUMOs-PLA2融合表达载体,并获得相应高纯度的融合蛋白。用去SUMO化酶SENP1对这些底物蛋白进行切割鉴定。得到了高纯度的SUMO化底物蛋白SUMOs-GST,6×His-SUMOs-GST,6×His-SUMOs-PLA2,并且用SENP1酶对SUMO化底物蛋白SUMOs-GST,6×His-SUMOs-GST,6×His-SUMOs-PLA2成功的进行酶切分离。
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