2-5A和RNase L基因植物表达载体构建及对烟草和小麦的遗传转化

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在哺乳动物体内存在着干扰素抗病毒系统,病毒的感染刺激干扰素的产生,在病毒感染的细胞中,干扰素又诱导免疫系统产生许多种活性蛋白抑制病毒的增殖,2-5A合成酶就是其中的一种。2-5合成酶被RNA病毒复制中间体dsRNA激活后催化nATP合成2-5A,2-5A激活RNase L降解病毒的RNA达到抗病毒的目的。 本文利用2-5A基因和RNase L基因,通过中间载体pJIT163将2-5A基因和RNase L基因克隆到双元植物表达载体pBINplus上,分别构建了2-5A基因的植物表达载体pBIN2-5A和RNase L基因的植物表达载体pBINRL。利用冻融直接转化法把pBIN2-5A和pBINRL分别转入土壤农杆菌LBA4404中,在农杆菌介导下,转化烟草“云烟87”,分别获得了转2-5A基因和RNase L基因以及同时转此两种基因的再生植株。对再生烟草植株进行了PCR检测,初步证明获得了转基因植株。用烟草花叶病毒蚕豆株系(TMV-B)和地黄花叶病毒(ReMV)进行攻毒试验,有关的抗病性结果正在调查中。 利用2-5A基因和RNase L基因的单子叶植物表达载体p2-5A-RNase L以及除草剂抗性基因表达载体pAHC,采用基因枪共转化法,对小麦“豫麦18”进行遗传转化,共转化了大约10000个外植体(盾片),获得绿色转化株167株(T0),经室内春化,温室栽种,获得了T0种子;对T1代再生植株进行了PCR筛选鉴定,初步鉴定出4个阳性株系,目前已收获了T1代种子。
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