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Tim-1(T cell immunoglobulin domain and mucin domain protein-1),又称人甲型肝炎病毒受体-1(human hepatitis A virus receptor, hHAVcr-1)或肾损伤分子-1(kidney injury molecule1,KIM-1),是Tim家族基因中第一个被发现的分子。Tim-1表达于CD4+T细胞,在抗原刺激初期即开始转录,为T细胞的激活提供共刺激信号,参与T细胞的增殖与分化,并可以抑制外周耐受的发生。Tim-1基因编码蛋白为Ⅰ型跨膜蛋白,是一个由N末端免疫球蛋白V区结构域(IgV)、黏蛋白样结构域、跨膜区和一个带有磷酸化基序的胞质尾区构成。Tim-1分子的编码基因具有多态性和配体多样性,这种特性与多种自身免疫性疾病和变态反应性疾病的发生有非常重要的关系。Tim-4是Tim-1的天然配体,Tim-1/Tim-4相互作用可调节T细胞的活化增殖,调节Thl/Th2细胞平衡。因此,Tim-1分子参与了多种Thl/Th2细胞失衡性自身免疫性疾病(如多发性硬化症MS、系统性红斑狼疮SLE、实验性自身免疫性脑脊髓炎EAE、类风湿性关节炎RA等)和过敏性疾病(如哮喘、过敏性鼻炎、过敏性湿疹等)的发生、发展过程。将Tim-1分子大量表达,将可能成为一种治疗这些疾病的基因工程药物。最近的研究中,在人源化SCID (Severe combined immune deficient disease)小鼠实验性哮喘模型中,用识别人Timl-IgV结构域的单克隆抗体可以抑制T细胞的增殖,降低特异性Th2细胞反应,缓解哮喘病情,并起到一定的治疗作用。因此,我们设想Tim-1和配体结合的活性区域主要在胞外区的IgV结构域。本课题中,我们扩增出Tim-1胞外区的N末端免疫球蛋白V区结构域(IgV)的基因,插入原核表达载体PET28a,成功的构建了重组原核表达质粒PET28a-Tim-1(IgV)。转化表达宿主菌BL21(DE3),筛选出高表达Tim-1(IgV)的菌株BL21(DE3)-PET28a-Tim-1(IgV)。表达的Tim-1(IgV)主要是以包涵体的形式存在。中试发酵的摸索,进一步提高了Tim-1(IgV)的表达水平。目的蛋白可达到湿菌的16.7%,得率可达21.55mg/L。包涵体经洗涤,变性,纯化,复性后,纯度达85%以上。通过CCK-8试剂盒检测,表明Tim-1(IgV)可以有效抑制由anti-CD3mAb和anti-CD28mAb协同刺激的Jurkat细胞的增殖；另外通过Lipid-Protein Overlay Assay的方法,验证了Tim-1(IgV)可以和磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine,PtdSer)结合,证明了复性后的Tim-1(IgV)是有生物学活性的。综上,相对于哺乳动物细胞表达系统,我们采用了pET原核表达系统,实现了蛋白质的高效表达,表达产物具有较高生物活性,为抗自身免疫性疾病药物研制和开发奠定了基础。