TLE4（transducin-like enhancer of split 4 (E(sp1) homolog,Drosophila)基因是断裂4(E(sp1)同源物,果蝇)转导蛋白样增强子，是Groucho共抑制子家族成员之一，基因全长149.912kb，由20个外显子和19个内含子组成。其编码的蛋白是一种转录辅阻遏物，包含一个SP和WD40的结构域。RT-PCR结果表明，TLE4基因在所有组织都表达，在脑部表达最高，特别是尾状核（caudate nucleus）。有研究表明，TLE4基因是胚胎干细胞促分化相关基因，它可以和一些转录因子结合，起到抑制转录激活作用，这种抑制作用是依靠Wnt信号通路中PAX5、CTNNB1和TCF家族成员来调节的。TLE4基因的表达调控对细胞的命运决定及胚胎发育起着重要的作用。然而，有关于TLE4基因的转录调控还未见报道。本研究以小鼠基因组序列为基础，克隆小鼠TLE4基因的上游调控序列，并利用生物信息学方法预测其中转录因子结合位点。构建含不同长度的缺失片段的报道子表达载体，通过双荧光素酶报告活性分析检测TLE4启动子区不同长度片段在小鼠畸胎瘤细胞（F9）及小鼠胚胎干细胞（ES）中瞬时转染后的活性，主要研究内容如下：　　 1.克隆了小鼠TLE4基因上游调控区包括5’侧翼及编码区在内的2849bp序列，通过测序及序列比对，结果和GenBank中小鼠TLE4序列(No. AC 000041）完全一致。　　 2.培养小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cells ,ES)和小鼠畸胎瘤(F9 )细胞，经过在体外传代观察，细胞形态均一，在体外生长状态良好，可以稳定传代，为后继实验奠定基础。　　 3.分别提取小鼠ES与F9细胞总RNA，利用RT-PCR检测TLE4基因的表达情况，结果显示TLE4基因在两种细胞内均表达。　　 4.利用生物信息学分析预测发现在该基因上游调控区（-2027bp～-1927bp）含有一个功能性的热激蛋白转录因子（heat shock transcription factor，HSF）的结合位点。　　 5.构建7个缺失不同DNA片段的荧光素酶载体，分别瞬时转染小鼠ES与F9细胞，利用双荧光素酶报告基因检测系统对其活性进行检测得到，两种细胞的检测结果一致，显示在TLE4基因启动子区（-2521bp～-2137bp）存在负性调控元件，而启动区（-2137bp～-1794bp）活性最强。　　 6.针对启动子区（-2137bp～-1794bp）再次构建3个缺失不同DNA片段的荧光素酶载体，瞬时转染小鼠ES，经双荧光素酶报告系统检测得出TLE4 基因在（-2027bp～-1927bp）区活性较强，与生物信息学预测结果相符。