近年来,双靶点抑制剂由于其高效低毒的特点,逐渐成为癌症治疗领域的研究热点。组蛋白赖氨酸特异性去甲基化酶1（Histone lysine specific demethylase 1,LSD1）可通过其去甲基作用调控癌细胞的多种生命活动。DCN1（Defective in cullin neddylation 1）可以通过调节cullin的类泛素化修饰从而促进细胞的增殖和转移。本课题组前期研究发现,以三氮唑并[1,5-α]嘧啶为核心结构的DCN1抑制剂化合物383,可在MGC-803细胞中选择性抑制Cul3/1类泛素化过程。此外,课题组证实三氮唑并[1,5-α]嘧啶衍生物C26可通过靶向LSD1抑制细胞迁移。因此,本课题首次提出,化合物383为LSD1/DCN1双靶点小分子抑制剂,并对其在胃癌细胞中靶向LSD1发挥的抗肿瘤作用及机制进行了探究。本课题的具体研究内容及成果如下所示:1.化合物383可以靶向抑制LSD1的活性体外酶活性实验证明了化合物383(IC50=287.97±2.46 n M)和524(IC50=467.11±2.67 n M)对LSD1的选择抑制作用。细胞热转移（CETSA）结果显示,化合物可与LSD1靶向结合从而提高LSD1的热稳定性。Western blot实验结果显示,化合物383以剂量依赖的方式上调LSD1底物H3K4me1和H3K4me2的表达。免疫沉淀实验结果证明,化合383可诱导LSD1通过蛋白酶体途径降解。因此,化合物383可在MGC-803细胞中靶向抑制LSD1的活性并诱导其降解。2.化合物383可以靶向LSD1诱导细胞周期阻滞并抑制细胞增殖本课题选择对DCN1无抑制作用的383同系列化合物524作为对照,MTT实验结果证明,MGC-803细胞系对化合物383最敏感(IC50=0.53μM),且与化合物524相比,化合物383展现了更强的细胞增殖抑制作用。此外,敲低LSD1降低了细胞增殖活性和细胞对化合物383的敏感性。细胞周期实验证明,化合物383可诱导MGC-803细胞周期阻滞在G2/M期,但LSD1敲低逆转了化合物383引起的细胞周期阻滞作用。因此,化合物383可以靶向LSD1诱导细胞周期阻滞并抑制细胞增殖。3.化合物383可以靶向LSD1抑制胃癌细胞侵袭和迁移细胞划痕实验和Transwell实验结果表明,化合物383对MGC-803细胞迁移和侵袭的抑制作用呈剂量依赖性。Western blot实验结果显示,随着化合物383浓度的增加,上皮细胞标志物E-cadherin和ZO-1的表达增加,间充质标记物N-cadherin和ZEB-1的表达降低。此外,染色质免疫沉淀（Ch IP）实验结果显示,化合物383可通过靶向LSD1促进E-cadherin启动子处H3K4me1的富集,进而上调E-cadherin表达并抑制胃癌细胞迁移和侵袭。4.化合物383在裸鼠移植瘤模型中的抗肿瘤作用及机制研究通过构建MGC-803细胞裸鼠移植瘤模型来检测化合物383的体内抗肿瘤作用。瘤体积等实验结果证明,与化合物524相比,化合物383展现了更强的肿瘤生长抑制作用。H＆E染色实验结果证明了化合物的生物安全性。免疫组织化学（IHC）实验结果证明,化合物383可抑制肿瘤组织中的LSD1的表达并上调H3K4me1的表达量,这与体外实验结果相一致。综上所述,本课题首次确认化合物383为LSD1/DCN1双靶点小分子抑制剂。同时,与LSD1单靶点抑制剂化合物524相比,化合物383展现了更强的抗肿瘤活性。因此,化合物383作为高效的DCN1/LSD1抑制剂可为进一步开发双靶点小分子抑制剂和临床个体化用药提供重要的理论依据。