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目的:本项研究以混合游离脂肪酸（free fatty acids,FFA）构建Hep G2肝细胞脂肪变性模型,通过观察各组肝细胞脂肪变性和脂质积累,旨在探讨槲皮素（quercetin,Que）在肝细胞脂肪变性中的作用。方法:1.构建FFA诱导的肝细胞脂肪变性模型。槲皮素进行干预处理,利用CCK-8法测定细胞活性,油红O染色观察肝细胞内脂滴改变,共同确定槲皮素最佳干预方式和浓度。2.将细胞随机分为3组:对照（Control）组、模型（FFA）组和槲皮素（Que）组。Control组用正常培养液培养;FFA组用1 mmol/L的混合FFA溶液（油酸:棕榈酸=2:1）干预24 h;Que组在FFA组基础上30μmol/L槲皮素后处理24 h。细胞相应处理培养48 h后检测各项指标。3.油红O染色观察肝细胞中脂滴变化。4.GPO-PAP法测定肝细胞中甘油三酯（triglyceride,TG）含量。结果:1.1 mmol/L的混合FFA溶液（油酸:棕榈酸=2:1）诱导肝细胞脂肪变性,30μmol/L槲皮素后处理方式红色脂滴最少并且不影响Hep G2细胞的正常增殖,因此确定30μmol/L槲皮素后处理方式用于后续实验。2.油红O染色显示,与Control组相比,FFA组肝细胞红色脂滴显著增多且比较大,而槲皮素干预后肝细胞红色脂滴较FFA组明显减少且体积变小。3.TG含量可反映肝细胞脂质积累程度。与Control组TG含量0.39±0.03mmol/gprot相比,FFA组TG含量显著增加为2.17±0.31 mmol/gprot（P＜0.01）,而槲皮素干预后TG含量较FFA组显著下降为1.12±0.16 mmol/gprot（P＜0.05）。结论:槲皮素可改善FFA诱导的肝细胞脂质积累和脂肪变性。目的:以FFA诱导肝细胞脂肪变性模型,观察槲皮素和雌激素对FFA诱导的肝细胞脂质积累和脂肪变性的影响,比较槲皮素和雌激素对肝细胞中过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子-1α（peroxisome proliferator-activated receptorγcoactivator-1α,PGC-1α）表达、过氧化物酶体增殖剂激活受体α（peroxisome proliferator-activated receptorα,PPARα）表达、解偶联蛋白2（uncoupling protein2,UCP2）表达、活性氧（reactive oxygen species,ROS）和炎性因子肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor alpha,TNF-α）和肉碱棕榈酰转移酶1α（carnitine palmitoyl transferase 1α,CPT1α）表达的影响,探讨其中可能涉及的类似保护机制。方法:1.肝细胞肝脂肪变性模型的建立与槲皮素最佳干预方式以及浓度的选取依据第一部分。雌激素干预处理后,利用CCK-8法测定细胞活性,油红O染色观察肝细胞内脂滴变化,共同确定雌激素最佳干预方式和浓度。2.将细胞随机分为4组:对照（Control）组、模型（FFA）组、阳性药雌激素对照（E2）组和槲皮素（Que）组。Control组用正常培养液培养;FFA组用1 mmol/L的混合FFA溶液（油酸:棕榈酸=2:1）干预24h;E2组FFA干预24 h+1μmol/L雌激素后处理24 h;Que组FFA干预24 h+30μmol/L槲皮素后处理24 h。细胞相应处理培养48 h后检测各项指标。3.油红O染色以显微镜观察肝细胞中脂滴变化。4.GPO-PAP法测定肝细胞中TG含量。5.DCFH-DA法检测肝细胞中ROS水平。6.ELISA法检测肝细胞中炎性因子TNF-α蛋白含量。7.RT-PCR检测肝细胞中PGC-1α、PPARα、UCP2和CPT1αm RNA表达水平。结果:1.相对于FFA组,1μmol/L和10μmol/L雌激素后处理可减轻红色脂滴聚集,结合CCK-8结果1μmol/L的雌激素使细胞活力明显提高,因而选取1μmol/L雌激素后处理方式进行后续实验。2.油红O染色结果显示,FFA组肝细胞内有较多的红色脂滴聚集,雌激素和槲皮素干预后减少。3.TG含量可以反映肝细胞脂质积累的程度。FFA组可以显著增加肝细胞TG含量（P＜0.001）,而雌激素干预后使TG含量下降了34.38%（P＜0.05）,槲皮素干预后使TG含量降低了45.16%（P＜0.05）;槲皮素组与雌激素组相比无统计学差异。4.CPT1α表达可以反映线粒体脂肪酸β氧化功能。FFA组CPT1αm RNA的表达水平下降（P＜0.05）,而雌激素干预后使CPT1α表达水平增加了5.91倍（P＜0.001）,槲皮素干预后使CPT1α的表达水平上调了5.64倍（P＜0.001）;槲皮素组与雌激素组相比无统计学差异。5.PGC-1α在激活肝细胞线粒体脂肪酸β氧化功能方面有至关重要的作用。FFA组PGC-1αm RNA的表达水平降低（P＜0.05）,而雌激素干预后使PGC-1α的表达增加了2.01倍（P＜0.001）,槲皮素干预后使PGC-1α的表达上调了1.68倍（P＜0.01）;槲皮素组与雌激素组相比无统计学差异。6.PPARα是介导PGC-1α激活线粒体脂肪酸β氧化的重要调节因子。FFA组PPARαm RNA的表达水平下降（P＜0.05）,而雌激素干预后使PPARα的表达水平增加了3.51倍（P＜0.01）,槲皮素干预后使PPARα的表达水平上调了3.35倍（P＜0.01）;槲皮素组与雌激素组相比无统计学差异。7.UCP2是介导PGC-1α减少线粒体ROS产生的重要调控因子。FFA组UCP2m RNA的表达水平下降（P＜0.05）,而雌激素干预后使UCP2的表达增加了1.93倍（P＜0.001）,槲皮素干预后使UCP2的表达上调了2.61倍（P＜0.001）;槲皮素组与雌激素组相比无统计学差异。8.DCFH-DA孵育肝细胞后可反映ROS荧光强度变化。荧光显微镜显示,FFA组ROS绿色荧光信号明显增强,而雌激素组和槲皮素组ROS绿色荧光信号均减弱。此外,FFA组肝细胞TNF-α蛋白含量增多（P＜0.01）,而雌激素干预后使TNF-α蛋白含量下降了29.88%（P＜0.001）,槲皮素干预后使TNF-α蛋白含量降低了23.22%（P＜0.01）;槲皮素组与雌激素组相比无统计学差异。结论:槲皮素可能通过驱动PGC-1α表达,一以上调PPARα表达,二以上调UCP2表达减少肝细胞ROS和TNF-α生成,共同激活线粒体脂肪酸β氧化功能,发挥雌激素样肝保护作用,最终减轻肝细胞脂质积累和脂肪变性。