川芎嗪对脂多糖诱导的内皮细胞损伤的保护作用

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研究目的:探讨川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)中Rho A、Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶2(Rho associated coiled coil forming protein kinase2,ROCK2)、肌球蛋白轻链(myosin light chain,MLC)磷酸化及埃兹蛋白-根蛋白-膜突蛋白(Ezrin-Radixin-Moesin,ERM)磷酸化表达的影响,以及肌动蛋白纤维(actin filament,F-actin)细胞骨架在内皮细胞中形态和分布的变化。研究方法:以体外培养的HUVECs为实验对象,分为Control组、LPS组(0.1μg/ml)和TMP组(0.5 mg/ml,1.0 mg/ml,1.5 mg/ml)5组,n=6。预处理:①Control组和LPS组:培养液中分别加等量的培养基;②TMP组:培养液中分别加入不同浓度的TMP预处理12 h。预处理结束后:①Control组:培养液中加等量的培养基;②LPS组和TMP组:在培养液中分别加入LPS培养12 h。免疫荧光法观察细胞骨架肌动蛋白形态及分布的变化,荧光定量PCR测定内皮细胞Rho A、ROCK2和p-Ezr m RNA表达,Western blotting法测定内皮细胞Rho A、ROCK2、p-MLC和p-ERM蛋白水平表达。实验结果:与对照组相比,LPS组F-actin形态学发生明显改变,胞质内由F-actin组成的应力纤维呈逐渐增多、增粗趋势,外周致密带明显断裂,细胞间空洞状裂隙增大。TMP组F-actin外周致密带变细,空洞状裂隙变小,细胞形态明显好于LPS组。与对照组相比,LPS组Rho A、ROCK2、p-MLC和p-ERM蛋白及Rho A、ROCK2和p-Ezr m RNA表达均显著升高(P<0.01);与LPS组相比,TMP三组Rho A蛋白表达与m RNA表达均无显著差异,且TMP三组之间Rho A的表达也无显著差异,ROCK2、p-MLC和p-ERM蛋白及ROCK2、p-Ezr m RNA表达均明显降低(P<0.01),且TMP三组之间ROCK2、p-MLC和p-ERM的分子表达均有显著差异。结论:川芎嗪对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用可能是通过抑制Rho/ROCK信号通路中ROCK2、p-MLC和p-ERM的表达,以减弱脂多糖对内皮细胞骨架的损伤。
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