恶性肿瘤已成为目前人类死亡的主要原因之一，发病率及死亡率在多数国家仍在升高。由于肿瘤患者就诊时60％～70％已属晚期，治疗效果较差，因此研究和探讨姑息治疗尤为重要。许多晚期肿瘤病人常伴有阴虚证，易导致患者免疫力降低，从而增加治疗的并发症，严重影响患者的生活质量，加速其死亡。如果能够找出肿瘤与阴虚证的关系并探讨阴虚证的本质和发病学机理，掌握肿瘤病人出现阴虚证时体内发生的病理生理变化规律及其产生的分子机理，就能提高恶性肿瘤等疾病的中医治疗效果，改善病人的生活质量。申维玺、孙燕等运用分子生物学的理论和方法进行研究，在国内外首先提出了：阴虚证的本质是细胞因子，其基本发病学机理是由于机体在各种致病因素的损害作用下，白细胞介素1(interluekine-1，IL-1)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor，TNF)等炎性细胞因子的基因表达水平相对增强，生物学活性相对升高，导致细胞因子基因表达调控异常，引起细胞因子网络紊乱的结果。目的本实验应用基因芯片和免疫组化技术分别从基因水平及蛋白水平探讨了肿瘤合并阴虚证时TNF及其受体表达的变化规律，来验证阴虚证的发病学机理是由于IL-1、TNF等炎性细胞因子的基因表达水平相对增强、生物学活性相对升高引起细胞因子网络紊乱的这一理论研究结论。方法1．应用Affymetrix基因表达谱芯片检测肿瘤阴虚证患者TNF及其受体家族的基因表达水平选取3例肿瘤阴虚证患者和3例肿瘤无阴虚患者。其中阴虚证患者：肺癌、结肠癌、胃癌患者各1例：无阴虚患者：肺癌、结肠癌、胃癌患者各1例。采集阴虚证和无阴虚患者的外周血标本各2ml。将上述病人的总RNA提取后，分别逆转录成cDNA。再进行测试芯片的杂交、沈染和分析，根据测试芯片的结果再杂交表达谱芯片，芯片采用高分辨率扫描仪进行扫描，将扫描图像信号转化为数字信号，应用基因芯片处理软件进行数据分析，用Normalization方法将所有探针组的信号值排序，得到它们之间基因表达的差异信息。2．应用免疫组化方法检测肺癌阴虚证患者肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor alpha，TNF-α)及其受体肿瘤坏死因子受体Ⅰ(tumor necrosis factor receptorⅠ，TNFRⅠ)的蛋白表达水平选取20例肺癌阴虚证患者和20例肺癌无阴虚患者，其中肺癌阴虚证患者男性9例，女性11例，年龄41～70岁，平均年龄58.85±9.34岁；肺癌无阴虚患者男性10例，女性10例，年龄37～70岁，平均年龄57.15±9.29岁。分为两组：肺癌阴虚证组和肺癌无阴虚组。以两组患者手术后大体肺石蜡包埋组织为材料，应用免疫组织化学方法对两组患者TNF-α及TNFRⅠ的蛋白表达情况进行检测分析。采用SPSS11.0统计软件包进行数据分析，统计数据采用x~2检验，取α=0.05为显著性水准。结果1．基因芯片的结果显示，与无阴虚患者相比：肺癌阴虚证患者外周血的TNF-α、TNFRⅠ、肿瘤坏死因子受体Ⅱ(tumor necrosis factor receptorⅡ，TNFRⅡ)、肿瘤坏死因子受体超家族10(tumor necrosis factor receptor superfamily，member 10，TNFRSF10)、肿瘤坏死因子超家族13b(tumor necrosis factor superfamily，member 13b，TNFSF13b)等细胞因子的基因表达水平升高，而肿瘤坏死因子-α诱导蛋白8(tumor necrosis factor alpha-induced protein 8，TNFAIP8)的基因表达水平降低。结肠癌阴虚证患者外周血的TNF-α、肿瘤坏死因子-β(tumor necrosis factor beta，TNF-β)、肿瘤坏死因子超家族8(tumor necrosis factor superfamily，member 8，TNFSF8)、肿瘤坏死因子超家族10(tumor necrosis factor superfamily，member 10，TNFSF10)、TNFSF13b、肿瘤坏死因子-α诱导蛋白6(tumor necrosis factor alpha-induced protein 6，TNFAIP6)、肿瘤坏死因子受体超家族17(tumor necrosisfactor receptor superfamily，member 17，TNFRSF17)、肿瘤坏死因子受体超家族25(tumor necrosis factor receptor superfamily，member 25，TNFRSF25)的基因表达水平升高；TNFRⅠ、TNFRⅡ、肿瘤坏死因子超家族5(tumor necrosis factor superfamily，member 5，TNFSF5)、TNFAIP8的基因表达水平降低。胃癌阴虚证患者外周血的TNF-α、TNF-β、TNFRⅠ、TNFRⅡ的基因表达水平升高；TNFSF5、TNFSF10、TNFSF13b、TNFAIP6、TNFAIP8、TNFRSF17的基因表达水平降低。2．免疫组化的结果显示在肺癌细胞和非肺癌细胞内TNF-α染色水平与肺癌阴虚证有关：肺癌阴虚证组的肺癌细胞和非肺癌细胞内TNF-α染色水平高于肺癌无阴虚组，差别有统计学意义(P＜0.05)；在肺癌细胞和非肺癌细胞内TNFRⅠ染色水平与肺癌阴虚证无关：肺癌阴虚证组的肺癌细胞和非肺癌细胞内TNFRⅠ染色水平与肺癌无阴虚组的差别无统计学意义(P＞0.05)。结论1．本研究从肿瘤合并阴虚证的角度出发，分别从基因水平和蛋白水平验证了TNF与阴虚证的相关性。从TNF的表达方面验证了申维玺、孙燕等提出的阴虚证本质是细胞因子的理论模型，即：恶性肿瘤合并阴虚证时，由于机体在各种致病因素的作用下，TNF-α等炎性细胞因子的基因表达水平增强、生物学活性相对升高，而抗炎性细胞因子不能有效地与之拮抗，从而引起细胞因子网络紊乱，出现一些慢性炎症的病理过程和临床综合征，即为阴虚证。2．阴虚证的本质和发病学机理具有一定的异质性：不同肿瘤，不同病例个体阴虚证的发病学机理并不完全相同，体内TNF及其受体家族基因表达的变化也有所不同。3．推测阴虚证的发生机制是由于机体在各种致阴虚证发生的病因因素的作用下，通过一定的信号传导通路，激活了细胞内核因子-κB(nuclear factor kappa B，NF-κB)等转录因子的活性，启动了TNF等细胞因子基因的表达，组织细胞内TNF等细胞因子的含量和生物学活性的相对或绝对升高，导致正常的细胞因子网络发生紊乱，从而诱发了阴虚证。