论文部分内容阅读
目的:急性缺血性脑卒中(Acute Ischemic Stroke,AIS)是指局部脑组织因血液循环障碍导致缺血缺氧而发生的软化坏死,并伴有相应部位的症状和体征,在全球已成为第一致残和第二致死原因,发病率约占脑卒中的80%。AIS治疗关键在于积极恢复脑梗死区血流供应以挽救缺血周边半暗带脑组织,目前多采取溶栓治疗,但由于短暂的时间窗限制,并且合并大动脉栓塞时再通率低,因此并未达到理想的治疗效果。人参稀有皂苷CK是原人参二醇型皂苷在肠道内的代谢产物,是人参皂苷在体内发挥活性作用的实体。研究表明,人参稀有皂苷CK能增强神经递质释放,改善脑血流供应,具有清除自由基、抗氧化等作用。人参稀有皂苷CK独特的药理活性已引起广泛关注,临床应用范围日趋广泛。本实验选取新生Sprague Dawley(SD)大鼠大脑皮质神经元(Neuron,N)为研究对象,利用低氧调控系统和神经元无糖培养基构建氧糖剥夺损伤后复氧复糖(Oxygen and glucose deprivation/reoxygenation and recovery of glucose,OGD/R)模型,同时选择银杏叶总提取物(extract of Ginkgo biloba,GBE)作为阳性对照药物,观察在预处理给药和急性给药两种不同给药方式下人参稀有皂苷CK对OGD/R诱导的神经元损伤的干预作用,进一步检验人参稀有皂苷CK对AIS的预防和治疗效果,为临床用药提供科学的实验依据。方法:1、提取新生SD大鼠大脑皮质神经元,通过微管相关蛋白2(Microtubule-associated protein 2,MAP2)对神经元进行免疫荧光染色及DAPI细胞核染色,观察细胞形态并鉴定纯度。2、通过低氧调控系统和更换神经元无糖培养基构建OGD/R模型,采用预处理给药和急性给药两种给药方式,通过MTT检测、LDH检测和TUNEL检测,观察人参稀有皂苷CK对OGD/R诱导前后神经元损伤的干预作用;设置不同的药物剂量,找到人参稀有皂苷CK作用于OGD/R诱导的神经元损伤发挥保护作用的最佳剂量。结果:1、MTT活细胞检测:与对照组相比,OGD组及OGD/R组神经元活性显著下降,且随着复氧时间延长进一步降低,人参稀有皂苷CK组细胞活性明显增强(P<0.05);人参稀有皂苷CK在预处理给药和急性给药方式下对OGD/R诱导的神经元损伤发挥保护作用的最佳剂量分别是10μg/ml和1μg/ml。2、LDH漏出率检测:与对照组相比,OGD组及OGD/R组LDH漏出率显著上升,且随复氧时间延长进一步增高,但OGD2h/R30min处理条件下除外;人参稀有皂苷CK组LDH漏出率明显降低(P<0.05)。3、TUNEL细胞凋亡率检测:与对照组相比,OGD组及OGD/R组细胞凋亡率明显上升,且随复氧时间延长进一步增加,人参稀有皂苷CK组细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。结论:1、OGD/R抑制神经元活力,并且对神经元的损伤随复氧时间延长而加重,呈现时间依赖性。3、在预处理给药和急性给药方式下,人参稀有皂苷CK对于OGD/R诱导损伤后的神经元均有保护作用,且最佳剂量分别为10μg/ml和1μg/ml。