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目的类风湿关节炎（Rheumatoid arthritis,RA）为可以逐渐进展的自身免疫性疾病,发病率和致残率较高,目前仍缺乏安全有效的药物治疗。尽管RA发病机制尚未明确,但目前已知其为以关节内滑膜细胞异常增殖及炎症因子过度分泌为主要病理特征的炎症性疾病[1]。目前多项研究已证明白花丹素（Plumbagin,PLB）有很强的抗炎、抗肿瘤及抗肝纤维化的作用。由此推测,PLB可能对RA有治疗作用。因此,本研究将白花丹素应用到RA患者体内提取的成纤维样滑膜细胞（Fibroblast-like synoviocytes,RA FLSs）中,探究白花丹素对RA FLSs的凋亡、侵袭及迁移能力的作用效果,并对相关机制进行初步探索,以期为治疗RA新药物的进一步研发提供理论基础。方法1、分离提取原代RA FLSs,并进行鉴定。手术分离RA病人关节腔内病变滑膜,胶原酶消化法纯化成纤维样滑膜细胞,显微镜观察其形态,并采用免疫荧光法检测胞内标志物血管细胞黏附因子-1（VCAM-1）。2、药物作用浓度选定及炎症因子TNF-α、IL-6分泌水平的检测。四甲基偶氮唑蓝染色（MTT）实验检测RA FLSs活力及增殖能力,将细胞进行分组处理:空白对照组（Con组）,细菌脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）组（1μg/mL LPS处理细胞）,LPS+PLB组（1μg/m L LPS+0.5、1.5、3、5、7.5、10μmol/LPLB处理细胞）,根据结果筛选合适的药物作用浓度处理细胞24h应用于以下实验。酶联免疫实验（ELISA）检测细胞培养上清液中炎症因子TNF-α、IL-6的含量,分组为:空白对照组（Con组）,LPS组（1μg/mL LPS处理细胞）,LPS+PLB组（1μg/m L LPS+0.5、3μmol/L PLB处理细胞）,以下实验均采用此种分组方法。3、RA FLSs凋亡情况的检测。Hoechst33342及流式细胞术检测RA FLSs的凋亡情况。Western Blot检测细胞中凋亡相关蛋白Bax,Bcl-2,cleaved-Caspase3的表达。4、RA FLSs侵袭、迁移情况的检测。Transwell侵袭实验测定RA FLSs侵袭情况,细胞划痕（Wound healing）及Transwell迁移实验检测细胞迁移情况。Western Blot检测RA FLSs中侵袭相关蛋白MMP-2与MMP-9的表达水平。5、JAK2/STAT3通路蛋白表达水平的检测。Western Blot检测p-JAK2、p-STAT3蛋白的表达量。结果1、细胞形态及标志物的鉴定。提取细胞传至第三代时可见形态均一,显微镜下观察细胞呈长梭形,相互交织,巢状生长,细胞核为卵圆形位于胞质中央;免疫荧光法测得FLSs标志物VCAM-1在胞质内呈阳性,说明本实验所用细胞为RA FLSs。2、PLB对RA FLSs增殖活力及炎症因子TNF-α、IL-6分泌水平的影响。MTT结果显示,PLB在LPS诱导后的RA FLSs中,与LPS组相比,有明显抑制增殖的作用（P=0.035,P=0.002,P=0.005,P=0.000,P=0.000,P=0.000）,PLB对LPS炎症诱导细胞的抑制率IC50为3.149μmol/L,故选择半数抑制率以下的浓度0.5、3μmol/L PLB处理细胞24 h进行后续实验。ELISA结果显示,LPS能明显诱导RA FLSs致炎因子TNF-α和IL-6的分泌（TNF-α:P=0.004,IL-6:P=0.007）,并且与LPS组相比,PLB对LPS诱导的致炎因子分泌有显著抑制作用（TNF-α:P=0.009,IL–6:P=0.001）。3、PLB对RA FLSs凋亡的影响。Hoechst33342及流式细胞术实验结果显示,与LPS组相比,PLB能促进RA FLSs凋亡,并呈剂量依赖性（P=0.002,P=0.000）。Western Blot结果显示,与LPS组相比,PLB能促进促凋亡蛋白Bax、cleaved-Cas pase3表达（P=0.004,P=0.000）,并抑制抗凋亡蛋白Bcl-2表达（P=0.000）。4、PLB对RA FLSs侵袭、迁移的影响。Transwell侵袭实验结果显示,与LPS组比较,PLB能降低RA FLSs侵袭能力（P=0.005,P=0.000）,并呈浓度依赖性。Wound healing实验及Transwell迁移实验结果显示,与LPS组比较,PLB能抑制RA FLSs迁移能力（P=0.041,P=0.000）。Western Blot结果显示,与LPS组相比,PLB能降低侵袭相关蛋白MMP-2,MMP-9的合成（MMP-2:P=0.005,P=0.000;MMP-9:P=0.001,P=0.000）,从而抑制RA FLSs的侵袭能力。5、PLB对RA FLSs JAK2/STAT3通路相关蛋白表达的影响。Western Blot结果显示,与LPS组相比,PLB能降低p-JAK2,p-STAT3表达水平（p-JAK2:P=0.015、P=0.000,p-STAT3:P=0.028、P=0.003）,从而抑制JAK2/STAT3信号通路。结论1、PLB能抑制RA FLSs的增殖及LPS诱导的炎症介质TNF-α、IL-6的分泌。2、PLB能促进促凋亡蛋白Bax的合成并抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的合成,从而诱导RA FLSs凋亡。3、PLB能降低蛋白MMP-2、MMP-9的合成,从而抑制RA FLSs侵袭、迁移能力。4、PLB可抑制JAK2/STAT3通路的活化。