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禽致病大肠杆菌在我国及世界上家畜养殖业中最为常见的致病菌,尤其在鸡养殖业最为常见,因其发生及分布范围广,造成发病率及死亡率高其不仅严重的制约着家禽养殖业的发展,到目前为止对于防治禽致病大肠杆菌病,除了大量使用抗菌药物外依然没有更好的办法。随着抗生素的长期使用以及滥用,导致耐药谱不断扩大,变异率也越来越高,不仅造成其耐药性不断增强,而且还出现了多重耐药菌株。因此,寻找新的药物靶点就十分重要。群体感应系统是广泛分布于各种细菌体内的一种调控系统,而Autoinducer-2(AI-2)是大肠杆菌内常见的种内及种间信息交流的主要信号分子。但在多重耐药菌株中,AI-2是否其致病性关联,学术界却鲜有报道。此实验揭示了AI-2对禽致病大肠杆菌金霉素耐药性的影响,进而说明AI-2对金霉素耐药基因tetA的调控机制。1.为了验证3株临床分离株的耐药程度,选用二倍稀释法对APEC 32,APEC28和APEC 35三株菌进行金霉素的耐药性实验。结果发现,金霉素对APEC 28,APEC 32和APEC 35的最小抑菌浓度都为120μg/mL,证明这三株都为金霉素耐药菌。2.在NCBI上查阅四环素耐药基因tetA、tetB、tetC的基因序列,并利用Primer5.0设计引物进行PCR实验得到耐药基因。实验发现,这3株临床分离菌中均含有耐药基因tetA,而都不含有tetB和tetC基因。3.为研究外源AI-2对这三株大肠杆菌的影响,选用菌落计数法(CFU)对其进行研究,结果表明,当添加外源AI-2后,AEPC 28与APEC 32对金霉素的耐药性增强而APEC 35的耐药性减少。4.选用反转录实时荧光定量PCR(RT-qPCR)对金霉素耐药基因tetA转录水平进行检测。结果显示,在金霉素压力下,添加外源的AI-2会导致APEC 28,APEC32,APEC 35的lsrR基因转录水平分别提高1.5倍、1.4倍、1.5倍,也会使APEC28的tetA基因的转录水平升高2.3倍,APEC 32的tetA基因的转录水平升高1.8倍,APEC 35的tetA基因的转录水平降低1.3倍。5.为进一步研究tetA基因与LsrR蛋白之间的关系采用凝胶阻滞实验来检测tetA基因与LsrR蛋白之间的关系,结果表明外源AI-2并非通过LsrR蛋白间接对tetA基因产生影响。研究证明群体感应信号分子AI-2对于耐四环基因tetA具有调节作用,但其调节作用并非通过AI-2胞内受体LsrR进行。该研究的进一步研究或可为治疗耐药型禽致病大肠杆菌提供新的药物靶标与治疗思路。