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铁皮石斛(Dendrobium officinale)是兰科(Orchidaceae)石斛属Dendrobium多年生草本植物,别名黄草,属于国家二级保护的贵重濒危药材。铁皮石斛含有石斛多糖、生物碱、氨基酸、微量元素等营养成分。现代药理研究证实,铁皮石斛具有增强机体免疫力、抗肿瘤等作用。目前铁皮石斛的市场供需严重不平衡,产量还远不能满足市场需求,而且生产成本高。本文对铁皮石斛的悬浮培养进行了研究,并对铁皮石斛茎段和种子为外植体的快速繁殖体系进行了优化,分别筛选出了各个组织培养阶段的最适培养基。主要结果如下:1.以铁皮石斛茎段为外植体,建立无性繁殖体系。以茎段为外植体,诱导腋芽,采用正交试验设计,从9种诱导培养基中选出的最优培养基为:1/2MS+1.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+70 g/L土豆泥+25 g/L白糖+6.5g/L琼脂+1 g/L活性炭,腋芽诱导率最高为54.1%;以诱导出的腋芽为材料,接种于9种生根培养基中生根,筛选得到的最优培养基为:N6+0.5 mg/L NAA+50 g/L土豆泥+30 g/L白糖+6.5 g/L琼脂+1 g/L活性炭,生根率最高为93%。2.筛选出高效诱导原球茎的最适培养基。本研究比较了铁皮石斛种子外植体,在固体培养基和液体培养基上的生长速率。研究发现:在MS培养基上萌发30天后,原球茎直径大小为0.473 mm-0.567 mm。在液体培养基中萌发30天后,原球茎直径大小为0.478 mm-0.956 mm,以原球茎直径为评价指标,选出的最优培养基为:1/2 MS+0.5 mg/L NAA+30 g/L糖,直径最大为0.956 mm。种子在液体培养基中萌发的原球茎直径明显比固体培养基大。3.筛选出原球茎生长成为幼苗的最适培养基。以种子在MS固体培养基中萌发30天为材料。一部分原球茎继续接种于固体培养中生长90天。正交实验结果表明:以幼苗鲜重为评价指标,选出的最优培养基为:N6+碳氮比5:25+0.3 mg/L 6-BA+0.8 mg/L NAA+30 g/L糖+6.5 g/L琼脂+1 g/L活性炭,鲜重最高为0.3 g/瓶;以幼苗生根率为评价指标,选出的最优培养基为Kc+碳氮比5:25+0.5 mg/L 6-BA+0.6 mg/L NAA+30 g/L糖+6.5 g/L琼脂+1 g/L活性炭,生根率最高为50.9%。收集培养90天后的幼苗,烘干测其粗多糖含量为27%。另一部分原球茎接种于液体培养基中增殖30天,正交实验结果表明:以原球茎增殖率为评价指标,选出的最优培养基为:1/2MS+碳氮比5:25+0.1 mg/L 6-BA+0.4 mg/L NAA+30 g/L糖,增殖率高达6.73。原球茎悬浮培养后接种于固体培养基分化、生根,正交实验结果表明:以幼苗苗高为评价指标,选出的最优培养基为N6+0.2 mg/L6-BA+0.6 mg/L NAA+50 g/L土豆泥+25 g/L糖+6.5 g/L琼脂+1 g/L活性炭,苗高高达1.74 mm;以幼苗鲜重为评价指标,选出的最优培养基为N6+0.1 mg/L 6-BA+0.4 mg/L NAA+100 g/L土豆泥+25 g/L糖+6.5 g/L琼脂+1 g/L活性炭,鲜重最高为4.07 g/瓶;以幼苗生根率为评价指标,选出的最优培养基为1/2MS+0.3 mg/L 6-BA+0.6 mg/L NAA+100 g/L土豆泥+25 g/L糖+6.5 g/L琼脂+1 g/L活性炭,生根率最高为90.76%。收集培养120后的幼苗,烘干测其粗多糖含量为30%。