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背景脑胶质瘤是人类最常见的颅内原发性肿瘤,也是中枢神经系统恶性肿瘤患者最重要的死亡原因。尽管临床上积极采用包括手术切除、放射和化疗等的综合治疗方案,恶性胶质瘤患者的总生存率仍然很低。替莫唑胺(temozolomide,TMZ)是一种新型烷化剂,它对治疗脑胶质瘤有确切的临床疗效。采用“手术+放疗同步TMZ化疗+辅助TMZ化疗”的综合治疗策略,对患者的无进展生存期(PFS)和五年生存率有显著的改善,但对总生存率无明显提高。然而,很多因素影响了TMZ的临床疗效,其中脑胶质瘤耐药现象的产生是主要原因之一。包括O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(O-6-methylguanine DNA-methyltransferase,MGMT)的内源性和诱导性高表达等原因促进了脑胶质瘤对TMZ治疗的抵抗。MGMT能专门去除TMZ添加的鸟嘌呤残基O6位置的甲基,从而逆转TMZ的细胞毒性效果。因此TMZ化疗效果可能通过抑制MGMT的活性得到明显的改善。NF-κB通路的异常激活促进了多种实体瘤(包括胶质母细胞瘤)的发生、进展和放疗或化疗抵抗密切相关。更深入的分子实验发现,MGMT的表达在一定程度上受NF-κB通路的调控,同时NF-κB通路本身,MGMT,以及BCL-XL、Bcl-2、Survivin等NF-κB通路的靶基因,可被放、化疗刺激表达,在细胞存活、抗凋亡和抵抗治疗方面发挥关键作用。本实验以脑胶质瘤U251细胞系为实验对象,利用二硫代氨基甲酸吡咯烷(ammonium pyrrolidinedithiocarbamate,PDTC),一种NF-κB特异抑制剂,单独或与TMZ一起处理U251细胞系,观察抑制NF-κB的功能对TMZ化疗效果的改变;同时检测TMZ处理条件下,PDTC如何改变MGMT和BCL-XL、Survivin等抗凋亡蛋白的表达水平。目的观察NF-κB抑制剂PDTC对脑胶质瘤U251细胞生物性状的改变;探究PDTC是否能增强U251细胞对TMZ化疗的敏感性;探讨PDTC改变TMZ效果可能涉及的分子机制。方法1.根据不同处理将细胞分为对照组(control)、TMZ组、PDTC组和TMZ+PDTC组,后两组又根据PDTC浓度的改变设立不同亚组。2.细胞增殖抑制用MTT实验检测,细胞周期分布和细胞凋亡比例的改变应用流式细胞术检测。3.q RT-PCR和Western blot分别检测基因MGMT、BCL-XL和survivin的mRNA和蛋白表达改变。结果1.联合使用PDTC时,TMZ对U251细胞的增殖抑制,凋亡诱导和周期阻滞作用显著增强(P<0.05);2.PDTC处理后MGMT、BCL-XL和survivin的mRNA和蛋白表达水平明显下降。3.TMZ联合PDTC组MGMT和BCL-XL的mRNA和蛋白表达水平显著低于TMZ组(P<0.05)。结论1.NF-κB抑制剂PDTC能显著提高U251对TMZ的敏感性2.PDTC提高TMZ的化疗效果的作用机制很可能与抑制DNA损伤修复基因MGMT和抗凋亡基因BCL-XL的表达相关。