【摘 要】
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目的①通过观察NLRP3炎症小体（inflammasome）在腹膜透析（Peritoneal Dialysis,PD）患者中的变化,探索其成为腹膜透析相关性腹膜纤维化（Peritoneal Fibrosis,PF）生物标记物的潜力,为临床诊断PF提供新思路。②运用网络药理学方法及分子对接技术探讨中药黄芪干预PD相关性PF的可能机制,为临床治疗PF提供新策略。方法①收集均已行腹膜平衡试验（Perit
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目的①通过观察NLRP3炎症小体（inflammasome）在腹膜透析（Peritoneal Dialysis,PD）患者中的变化,探索其成为腹膜透析相关性腹膜纤维化（Peritoneal Fibrosis,PF）生物标记物的潜力,为临床诊断PF提供新思路。②运用网络药理学方法及分子对接技术探讨中药黄芪干预PD相关性PF的可能机制,为临床治疗PF提供新策略。方法①收集均已行腹膜平衡试验（Peritoneal equilibration test,PET）的腹膜透析患者腹透流出液（Peritoneal Dialysis Effluent,PDE）,根据患者透析龄将标本分为腹膜透析不足1年患者组（短期组）、腹膜透析2～5年患者（中期组）、腹膜透析超过5年患者组（长期组）。运用实时荧光定量PCR技术测得腹透液脱落细胞中NLRP3、Caspasce-1、IL-1 β、IL-18、α-SMA的表达;记录患者临床资料、PET结果、Kt/V,运用Pearson法分析相关性。②运用中药系统药理学数据库、分析平台（Traditional Chinese Medicine System Pharmacology and Analysis Platform,TCMSP）以“黄芪”为检索词,得到黄芪的主要化学成分及作用靶点,并补充文献报道有相关药理学作用的成分作为潜在活性成分;以“Peritoneal Fibrosis（PF）”为关键词分别在OMIM、Genecards这两个疾病数据库中获取目前已报道的与PF相关的疾病靶点,随后取黄芪、PF的交集靶点;对上述交集基因通过STRING的数据库与Cytoscape 3.7.2生物信息分析软件构建“药物-成分-靶点-疾病”网络及“蛋白质-蛋白质互作（PPI）”网络并筛选其核心网络;基于R软件使用Bioconductor生物信息软件对核心靶点进行GO及KEGG富集分析;最终采用AutoDock软件将黄芪主要有效成分与PF核心靶点进行分子对接,得出其结合能力。结果①与短期组相比,长期组、中期组患者PDE中NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18、α-SMA表达增高（P＜0.05）;与中期组相比,长期组患者PDE中NLRP3、IL-1β、IL-18表达增高（P＜0.05）;IL-1β、IL-18 与α-SMA 水平呈正相关（r=0.511,P=0.021、r=0.618,P=0.002）;在与腹膜转运参数比较中,IL-1β与高转运总Kt/V、低转运患者出超呈负相关（r=-0.881、P=0.048,r=-0.809,P=0.015）。②筛选出20个黄芪活性成分及文献报道有相关药理作用4个,457个药物作用靶点,与674个PF疾病靶点取交集,得到86个共同靶点;GO功能富集分析提示黄芪拮抗PF主要参与了蛋白激酶B信号转导的调节、细胞对化学的应激反应、炎症反应的调节等通路;KEGG通路富集分析主要涉及调控肿瘤、PI3K-Akt、晚期糖基化终末产物/晚期糖基化终末产物受体（AGE-RAGE）、人类巨细胞病毒感染、HIF-1信号通路等;分子对接结果显示关键靶点与活性成分具有较好的结合能力。结论①NLRP3炎症体在较长透析龄患者PDE中高表达,并与α-SMA呈正相关,可能参与腹膜纤维化的形成;②NLRP3炎症体随透析龄延长表达增高,且IL-1β与低转运患者出超呈现负相关,有潜力成为诊断PF的生物标记物;③黄芪干预PF的分子机制可能是通过抑制炎症反应、氧化应激反应以及调节多种蛋白信号通路。
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